Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Pollack и Rifkin (1977) сообщили о подобных данных для дериватов мышиных клеток ЗТЗ, инфицированных SV 40 и SV 101. Хотя две туморогенные вирус-инфицированные линии имели повышенные уровни активатора плазминогена, две нетуморогенные инфицированные линии не обладали подобной активностью энзима. В самом деле, нетуморогенные инфицированные линии имели более высокий средний уровень секреции активатора плазминогена по сравнению с туморогенными линиями. В сериях из двух нетуморогенных мышиных линий и 8 туморогенных вирус-трансформированных 7 туморогенных сублиний обладали более низкими уровнями активатора плазминогена по сравнению с наиболее продуцирующими энзим нетуморогенными линиями (Rifkin, Pollack, 1977). Данные о том, что туморогенные и нетуморогенные вирус-инфицированные линии имеют сходную степень индукции фибринолитической активности, позволяют предположить: стимуляция фибринолиза вирусом
4*
51
не является причиной онкогенной трансформации, а два эффекта обусловлены различными клеточными реакциями, вызванными различными механизмами действия вируса.
Литературные сообщения о связи фибринолиза со спонтанной, химической и радиационной трансформацией in vitro также не поддерживают гипотезу Reich — Fischer. Существенное увеличение фибринолиза отмечалось для двух человеческих линий, трансформированных уретаном (Benedict et al., 1975), и пяти линий крысиной глиомы, индуцированной этилнитрозомочевиной (Hince, Roscoe, 1978). Три из четырех мышиных химически индуцированных туморогенных
1 /
линий, происходящих из СЗН/10ТуС18, также проявляли повышенную ФА, а одна — пониженную. Однако, нормальный статус «контроля» СЗН/10Ту/С18 сомнителен, поскольку эта линия, хотя
и нетуморогенна при инокуляции суспензии единичных клеток, вызывает опухоли в пробе.
Шесть из тринадцати туморогенных хомячковых линий, как сообщили Barrett и соавт., (1979, обладали повышенным уровнем фибринолиза после обработки бенз(а)пиреном, в то время как оставшиеся семь не проявляли значительной стимуляции. Полную утрату корреляции между туморогенностью и фибринолитической активностью продемонстрировали Montesano и соавт. (1977) для шести нетуморогенных эпителиальных линий печени крыс и десяти туморогенных сублиний. В этом эксперименте продемонстрировано как уменьшение, так и увеличение ФА вслед за трансформацией. Подобное наблюдение отмечено (Shimada et alM 1979) для тринадцати линий печени и гепатом крыс. Наконец, трансформированные радиацией дериваты эмбриональных клеток мышей BALB/c выявили уменьшение секреции активатора плазминогена (Rifkin, Pollack, 1977). Таким образом, доступная литература не может подтвердить любую стойкую связь между онкогенной трансформацией in vitro и изменениями, фибринолитической активности в общем или активатора плазминогена специфически.
2.6.3. Методологические трудности
Несколько артефактов осложняют изучение корреляции фибринолиза с туморогенностью. Наиболее важные из них включают различия между внутри- и внеклеточным уровнями ФА, плотностной зависимостью и клональной вариабельностью ФА.
В большинстве исследований фибринолиза проводилось измерение ФА энзима, секретируемого во внеклеточную среду. Однако, многие клетки, секретирующие энзимы ФА, также обладают часто сравнимой внутриклеточной активностью, которая в некоторых случаях превышает уровни внеклеточной (Romsdahl et al., 1961; Unkeless et al., 1974; Benedict et al., 1975; Jones et al., 1976; Rifkin, Pollack, 1977; Jaken, Black, 1979; Laug, 1979). Изредка клетки с высоким уровнем внутриклеточной ФА не секретируют энзимы, опре-
52
деляющие ФА (Jaken, Black, 1979). Функция опухолевой ФА неизвестна, поэтому не ясно, важны ли оба компонента — внутри- и внеклеточный — или какой-то один из них. Таким образом, сравнительные исследования, в которых производилось измерение только внеклеточного фибринолиза, должны быть интерпретированы с некоторой предосторожностью.
Подобно множеству других клеточных процессов фибринолиз и продукция активатора плазминогена зависят от плотности клеток (Romsdahl et al., 1961; Jaken, Black, 1979; Laug, 1979). В хомячковой системе клеток меланомы В4 продукция активатора плазминогена не начиналась до тех пор, пока не достигался максимум плотности популяции (Romsdahl et al., 1916), в то время как в эндотелиальных клетках аорты теленка наблюдалось прогрессирующее увеличение продукции с увеличением плотности (Laug, 1979). Таким образом, сравнительное изучение видимого различия ФА между двумя линиями может отражать дифференциальную чувствительность регуляции с помощью зависимых от плотности клеточных взаимодействий или разницу в скорости роста, что создает неодинаковые плотности популяций ко времени измерения ФА скорее, чем истинное различие в природной способности для фибринолиза при специфичной плотности.
Наконец, клональная вариабельность и повторные вариации анализа указывают, что различие между повторными образцами или между субпопуляциями единичной культуры часто равно или превышает различия в ФА между линиями. Хотя стандартное отклонение уровней ФА для повторных клеточных культур составляет около 10 % значения для установленных линий, оно обычно колеблется от
