Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
В более недавних работах представлено несколько доказательств, которые поддерживают теорию, о том что трансформированные клетки более агглютинабельны Кон А по сравнению с нормальными клетками. Прежде всего нормальные клетки высоко вариабельны по агглютинабельиости. В то время как некоторые не агглютинабельны, другие являются высоко агглютинабельными. Sivak, Wolman (1972) выявили, что две из пяти культур различных нормальных взрослых и эмбриональных тканей были существенно более агглюти-набелыгы, чем клетки ЗТЗ. Три были идентичны по агглютинабель-ности Кон А клеткам SV-ЗТЗ-прототипу предположительно трансформированных линий. Эти данные продемонстрировали недвусмысленно, что нормальные клетки могли быть высоко агглютинабельны, и навели на мысль, что мышиные клетки ЗТЗ не могут быть образцом большинства нормальных клеток в агглютинабельиости Кон А. Высокая степень агглютинабельиости Кон А в настоящее время показана для ряда нормальных клеток, включая куриные эмбриональные клетки (Moscona, 1971), клетки, инфицированные неонко-генными вирусами (Zarling, Tevethia, 1971; Poste, Reeve, 1972), лейкоциты (Berlin, Ukena, 1972), эпителиальные клетки кишечника эмбриона человека (Weiser, 1972), ряд человеческих лимфобластоид-ных линий (Glimelius et al., 1975), эмбриона хомячка, тимус и печень новорожденных животных и лимфоузлы отъемышей (Berman, 1975), мышиные эмбриональные клетки (Marciant et al., 1976) и ряд линий клеток печени взрослых крыс (San et ah, 1979; Shimada et al., 1979).
Подобно нормальным клеткам туморогенные линии также значительно варьируют по своей агглютинабельиости Кон А. Некоторые агглютинируются легко, но многие, как показано сейчас, слабо или не агглютинируются вообще. Туморогенные линии с низкой агглютинабельностыо Кон А включают клетки ВНК (Cline, Livingston, 1971; Ozanne, Sambrook, 1971; Berman, 1975) и определенные их дериваты, инфицированные аденовирусами (Meager et al., 1978), хомячковые клетки НТ-1 (Salzberg, Green, 1972), некоторые спонтанно трансформированные клоны ЗТЗ (Grimes, 1974), мышиные клетки ЗТ12 и трансформированные вирусом саркомы мышей KMSV (Van Nest, Grimes, 1974), несколько мышиных лимфом (Rutishauser,
42
Sachs, 1975), мышиные клетки L и их гибриды с клетками печени крыс (Marciani et al., 1976) и множество крысиных гепатом (San et al., 1979; Shimada et al., 1979). В дополнение, клетки, эксплаити-рованные из мышиных сосудообразующих сарком, человеческих мне-лом и лимфом и карциномы молочной железы мышей, слабо агглютинабельны Кон А. Таким образом, слабая агглютинабельность Кон А не показательна для нормального статуса, так же как и высокая агглютинабельность не указывает на туморогенность.
В экспериментах по исследованию агглютинабельности родственных клонов, сублиний или тканевых серий случайно наблюдалась корреляция между туморогенностью in vivo и агглютинабельностью Кон А. Общая, хотя и не неизменная тенденция повышенной агглю-тинабельности наблюдалась для туморогенных сублиний клеток ЗТЗ (Grimes, 1974; Van Nest, Grimes, 1974) и для туморогешшх линий клеток почек мышей, индуцированных SV40 (Kurimura, Iiirano, 1972). В большинстве случаев, однако, туморогенность и агглютинабельность Кон А не связаны. Утрата корреляции между двумя признаками сообщалась для мышиных клеток ЗТЗ и их дериватов, инфицированных вирусом мышиной саркомы (Nomura et al., 1974), нескольких сублиний ВНК (Berman, 1975), более чем 20 человеческих лимфоцитарных, лимфобластоидных линий, лейкозных, лим-фомных и миеломных клеток (Glimelius et al., 1975), серии гибридов мышиных клеток L929 и крысиной гепатомы (Marciani et al., 1976), сублиний ВНК, инфицированных аденовирусами (Meager, 1978), и более чем дюжины линий крысиной печени (San et al., 1979; Shimada et al., 1979).
2.5.3, Методологические трудности
2.5.3.1. Артефакты токсичности
Кон А, так же как большинство лектииов, высоко токсичен для многих клеток (Shoham et al., 1970; Ozanne, Sambrook, 1971; Culp, Black, 1972) и может вызывать артефакты в пробе на агглютинацию путем литического освобождения ДНК, которая сама по себе является аффективным агглютинином, запуска процесса высвобождения расщепляющих ферментов (таких, как протеазы, липазы и гликозидазы, способных модифицировать клеточную поверхность и, следовательно, нарушать агглютинабельность), интерференции с синтезом новых рецепторов к Кон А, их встраиванием в плазматическую мембрану с последующим эндоцитозом или сбрасыванием в окружающую среду.
Диссоциация клеток в единичные клеточные суспензии — предпосылка для измерения агглютинабельности. Химические и энзиматические диссоциирующие агенты, используемые для этой цели, модифицируют свойства клеточной поверхности, включая агглютинабельность, и проявляют значительную токсичность ко многим типам клеток, нарушая их жизнеспособность и вызывая явный лизис (Owens et al., 1953; Skehan, Friedman, 1975; McKeehan, 1977; Smets et al.,
1979). Эти агенты могут вызывать при измерениях агглютинации те же артефакты, которые обсуждались в предыдущем параграфе.
