Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Однако сомнительно, может ли любая опубликованная работа по сравнительному изучению колониеобразующей активности быть воспринята, как она представлена. Настоящая техника выращивания является источником таких серьезных артефактов, что обнаруженная КОА клеточной линии может варьировать, по крайней мере, в несколько тысяч раз при относительно небольших изменениях в методике. Размер инокулята, состав агара, среды, схема питания и испарение — все может вызвать вариации значений наблюдаемой КОА на порядок или больше. Техника получения колоний не может уловить различий зависимого от субстрата роста и роста предшествующих агрегатов, дифференциальной чувствительности к растворимым ингибиторам, присутствующим в агаре, и дифференциальной чувствительности к голоданию в результате истощения питательных веществ и сыворотки. Наконец, критерии, используемые для оценки колоние-образования, в большинстве случаев полностью неадекватны и могут стать причиной серьезных артефактов в результате недооценки истинной КОА клеточных линий, формирующих маленькие колонии.
Вместе взятые методологические трудности настолько серьезны, что их необходимо учитывать в исследованиях, Однако нет ни единой опубликованной работы по изучению связи КОА и туморогенности, которая может заслуживать доверие.
2.5. АГГЛЮТИНАБЕЛЫЮСТЬ КОНКАНАВАЛИНОМ А (Кон А)
2.5.1. Предпосылка
Лектины — макромолекулы, которые обладают высоким связывающим сродством к углеводам. Кон А — растительный лектин из канавалии мечевидной, который связывает большое число сахаров и имеет особое высокое сродство с Ь-манно-Б-глюкопиранозидами и с Ь-ацетил-Б-глюкозидами (Poretz, Goldstein, 1970). В растворе Кон А образует многомерные молекулы, представленные идентичными субъединицами с молекулярной массой 27 кД. Основная форма при значениях pH выше 6,7 — тетрамерная, в то время как при более низких значениях pH преобладает димерная форма (Sharon, Lis* 1972). Кон А легко связывает углеводные остатки многих гли-
40
копротеинов и гликолипидов клеточной поверхности (Cline, Livingston, 1971; Ozanne, Sambrook, 1971; Cuatrecasas, 1973; Schmidt-Ullrich, Wallach, 1978). Он обладает выраженной биологической активностью, включая перераспределение клеточных поверхностных рецепторов (Nicolson, 1972; Yahara, Edelman, 1972), стимуляцию митоза (Smith, Goldman, 1972), ингибирование подвижности клеток (Friberg et al.» 1972) и фагоцитоза (Berlin, 1972), ингибирование диссоциации монослоя несколькими протеазами (Brown, 1973), ингибирование выявления с помощью трипсина специфических классов клеточных поверхностных гликопротеинов (Brown, 1973) и агглютинацию различных типов клеток (Inbar, Sachs, 1969; Cline, Livingston, 1971; Moscona, 1971; Ozanne, Sambrook, 1971; Berlin, Ukena, 1972; Salzberg, Green, 1972; Rutishause, Sachs, 1975).
2.5.2. Корреляция с туморогенностью
Доказательство того, что увеличение агглютинабельности клеток Кон А может сопровождать трансформацию in vitro, было впервые представлено Inbar и Sachs (1969). Эти исследователи обнаружили, что пять различных нормальных клеточных популяций (селезенки мыши, костного мозга крысы и эмбриональных клеток хомячка, крысы и мыши) не агглютинировались Кон А. Две установленные линии (ЗТЗ мыши и BS-C-1 обезьяны), которые, как предполагалось, являются нормальными, тоже были неагглютинабельными. В противоположность этому восемь клеточных линий мышей, хомячков и человека, инфицированных SV 40 или вирусом полиомы, значительно агглютинировались Кон А, так же как три лейкозные линии мышей и три линии хомячков, подвергнутые воздействию х-радиацией и химическими канцерогенами (Inbar, Sachs, 1969). Эти наблюдения были вскоре подтверждены несколькими лабораториями (Cline, Livingston, 1971; Eckhart et al., 1971; Ozanne, Sambrook, 1971) и были продемонстрированы в других системах культур, включая клетки ВНК и полиамавирус (Cline, Livingston, 1971; Ozanne, Sambrook, 1971; Noonan, Burger, 1973), куриные эмбриональные клетки и вирус саркомы Рауса (Burger, Martin, 1972), эмбриональные клетки хомячка и вирус саркомы Рауса с диметилнитрозамином (Shoham, Sachs, 1974). На основании данных исследований гипотеза о том, что агглю-тинабельность Кон А может быть коррелятом туморогенности, стала широко распространенной. Существовало общее предположение, что нормальные клетки были слабо агглютинабельпы или неагглютина-бельны вообще, однако злокачественно трансформированные клетки — высоко агглютинабельны.
Эти ранние исследования вызывают критические возражения. Используемая проба на агглютинацию была скорее субъективно визуальной, чем объективно количественной (Burter, Goldberg, 1967), и отражала больше эффекты второго порядка, чем истинную агглю-тинабельность (Oppenheimer, Odencrantz, 1972; Skehan, Friedman, 1975; Wright et al., 1977). Тесты на туморогенность in vivo не осуществлялись, поэтому нормальный или трансформированный статус используемых клеточных линий был в действительности неизвест-
41
ным. Почти во всех ранних исследованиях в качестве нормальных контрольных клеточных популяций изучали нормальные клетки или установленные линии клеток ЗТЗ и ВНК. Клетки ВНК, как сейчас известно, являются туморогеннымп (Defendi et al., 1963; MacPherson, 1963; Stoker, MacPherson, 1964; Schoental, 1967; Freedman, Shin, 1974; Berman, 1975; Kahn, Shin, 1979), и интерпретация, основания на их предполагаемом нормальном статусе, явно ошибочна. Хотя о клеточной линии ЗТЗ нельзя с определенностью сказать, что она тумо-рогенна, все же она почти наверняка аномальна (Boone et al., 1976). Выбор эмбриональных клеток в качестве нормального контрольного материала представляется логичным. Однако, недостаточная охарак-теризованность этих клеток не позволяет делать какие-либо пространные или обобщающие заключения об агглготинабельности нормальных клеток.
