Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
пропуская их в смеси с кислородом через нагретый до 750 С слой окиси меди
и хромата свинца, помещенный в трубку для сожжения. Двуокись углерода и
воду улавливают с помощью поглотительных аппаратов и определяют весовым
способом. Продукты окисления других элементов адсорбируются находящимися
в трубке для сожжения поглотителями (серебро или двуокись свинца).
ХШ.4.2.2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АЗОТА [124, 468]
Для выявления азота органическое вещество разрушают, прокаливая его с
металлическим калием. При наличии азота образуется цианистый калий,
который действием сернокислой закиси железа и хлорного железа переводят в
берлинскую лазурь (проба Лассеня). Эта проба неприменима при
одновременном присутствии азота и серы, так как вместо цианида может
образоваться роданистый калий.
Количественное микроаналитическое определение азота проводят методом
Дюма: фитотоксическое вещество, содержащее азот, сжигается за счет
кислорода раскаленной окиси меди в трубке, наполненной двуокисью
углерода. При этом углерод окисляется в двуокись углерода, водород в
воду, а весь содержащийся в веществе азот выделяется в виде элементарного
азота, который количественно вытесняется углекислым газом в азотометр с
раствором едкого натра или калия. Углекислота поглощается щелочью, а
газообразный азот собирается в верхней, градуированной части азотометра
(обычно емкостью 2 мл с градуировкой до 0,01 мл), где измеряется его
объем. После приведения полученного объема газа к нормальным условиям
вычисляют процентное содержание азота в веществе.
XIII.3.4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНОЙ МАССЫ
ФИТОТОКСИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ [124]
Для определения молекулярной массы чаще всего применяют криос-копический
метод (по понижению температуры замерзания раствора). При этом необходимо
пользоваться особо чувствительным термометром Бекмана, измеряющим
температуру с точностью не менее 0,005° С. Молекулярную массу определяют
по формуле М = 100 pA/PAtf где р - навеска исследуемого вещества; А -
молярное понижение температуры замерзания, т. е. такое, которое
наблюдается при растворении 1 моля вещества в 1000 г растворителя; Р -
масса растворителя; At - понижение температуры замерзания.
XIII.4.4. МЕТОДЫ СПЕКТРАЛЬНОГО АНАЛИЗА
[31, 77, 313, 619]
Для идентификации фитотоксических веществ применимы электронные спектры
поглощения в УФ и видимой областях от 200 до 1000 нм и колебательные
спектры в ИК-области от 400 до 4000 см-1- Электронные
343
спектры поглощения в УФ-области служат для групповой характеристики
веществ с ненасыщенными связями или с другими хромофорами. График
зависимости интенсивности поглощения от длины волны имеет вид кривой с
максимумами и минимумами, характерными для определенных хромофорных
групп. Однако максимумы могут смещаться в область длинных или коротких
волн под влиянием других функциональных групп, находящихся в молекуле
вещества. Тем не менее близкое приближение вида кривой к
электрофореграммам известных веществ позволяет идентифицировать вещество.
Если снимают спектр поглощения группы родственных веществ одного класса,
различающихся лишь числом и характером хромофорных групп, то
идентифицировать их можно более строго.
Идентификация с помощью УФ-спектроскопии ненадежна в тех случаях, когда
кривая поглощения имеет размытые максимумы. Такие кривые не отражают
специфики вещества, а максимум является суммарным отражением нескольких
хромофоров или свидетельствует о смеси веществ.
Электронная спектроскопия позволяет идентифицировать также и окрашенные
соединения, т. е. вещества, имеющие характерные максимумы поглощения в
видимой области спектра.
Важное значение для идентификации фитотоксинов имеют методы ИК-
спектроскопии, которые отличаются от электронной спектроскопии большей
сложностью. По ИК-спектру можно проследить за любыми, даже
незначительными взаимодействиями между атомами в молекулах, поэтому
совпадение кривых данных спектров является саэдрм убедительным
доказательством идентичности веществ. При снятии спектров фитотоксических
веществ обычно пользуются взвесью вещества в вазелиновом масле или в
таблетках бромистого калия.
Идентификацию веществ с помощью ИК-спектроскопии осуществляют двумя
способами: 1) сравнением спектра анализируемого соединения со спектрами
веществ определенного класса непосредственно или jno каталогу спектров;
2) определением функциональных групп по характеристическим полосам
поглощения. В ряде случаев можно однозначно идентифицировать вещества при
сочетании ИК- и УФ-спектров. Преимуществом спектральных методов является
незначительное количество вещества (5-10 мг), требуемое для анализа.
XIV. ИЗУЧЕНИЕ ГЕНЕТИКИ ГРИБОВ
XIV.1. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ
Гибридологический и мутационный анализы являются, как известно, основными
методами генетических исследований. При работе с грибами эти методы имеют
исключительно высокую разрешающую способность, что связано с
биологическими особенностями грибов. Многие виды легко культивируются на
