Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
тем точнее разделение. По мере того как один растворитель перестает
вымывать заметное количество вещества, его заменяют другим. Нейтральные
соединения рекомендуется последовательно элюировать петролейным эфиром,
бензолом, эфиром, спиртом. Иногда применяют смеси растворителей, например
петролейный эфир - бензол в соотношении 1:1. Чтобы получить вещество в
чистом виде, его перекристаллизовывают или перегоняют.
339
XIII.3.3.3. ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ [15, 100]
ТСХ позволяет быстро идентифицировать вещества, контролировать ход
реакций, наблюдать за процессом разделения сложных смесей и подбирать
оптимальные условия хроматографирования на колонках. В качестве сорбентов
для разделения фитотоксических веществ используют силикагель марки КСК,
очищенный от примесей солей тяжелых металлов (главным образом железа).
Для этого размолотый на кофейной мельнице силикагель заливают
концентрированной НС1 (1:1) и оставляют на сутки. Соляная кислота,
растворяя примеси, приобретает желтую окраску. Ее удаляют декантацией или
отсасывают на стеклянном фильтре № 1, а силикагель заливают новой порцией
чистой НС1. Эту операцию повторяют несколько раз (7-8) до тех пор, пока
соляная кислота не перестанет окрашиваться. Силикагель отмывают от НС1
бидистиллированной водой до отрицательной пробы на ионы С1~ (по AgN03).
Затем гель дважды обрабатывают ледяной уксусной кислотой, промывают
бидистиллированной водой (2-3 раза), затем 0,02 н. раствором NH4OH и,
наконец, тщательно промывают бидистиллированной водой (до нейтральной
реакции фильтрата). Затем следует двукратная обработка кипящим метанолом
(под тягой! температура кипения метанола 64,7° С). Отмытый таким образом
силикагель подсушивают на воздухе (под тягой!) до исчезновения запаха
метанола, затем выдерживают в течение 1 ч в термостате при температуре
110° С, просеивают через сито с размером пор 0,25 мм. Готовый для работы
силикагель хранят в эксикаторе над прокаленным хлористым кальцием.
Для приготовления тонкого закрепленного слоя сорбента к силикагелю
добавляют специально приготовленный гипс (CaS04 • 2Н20). Препарат гипса
квалификации "ч" готовят, добавляя к отфильтрованному теплому раствору
(NH4)2 S04 ("ч"; 20 г в 250 мл воды) раствор СаС12 ("ч"; 50 г в 200 мл
воды) и проверяют на полноту осаждения (добавление СаС12 в
отфильтрованный раствор не должно вызывать образования осадка). Осадку
дают отстояться, промывают 5-6 раз водой, отсасывают осадок гипса и
промывают до полного удаления NH^~ (проба реактивом Несслера). Осадок
гипса промывают спиртом и сушат при 103- 105° С в течение 2 ч, а затем
при 98-100° С в течение 4 ч.
Сорбент готовят смешиванием 30 г силикагеля и 10 г гипса с добавлением 60
мл бидистиллированной воды. Смесь растирают в ступке и энергично
встряхивают в колбе с притертой пробкой.
Полоски стекла размером 15 X 3 см (тщательно вымытые содой, хромовой
смесью, водой) покрывают слоем жидкого сорбента (по 3 мл на пластинку;
пользуются маленьким цилиндром или мерной пробиркой). Суспензию сорбента
равномерно распределяют по всей поверхности стекла. Пластинки помещают на
горизонтальный столик, подсушивают на воздухе около 30 мин, затем
помещают в термостат для активации на 15-30 мин при 110-120° С.
Активированные пластинки охлаждают 10 мин в эксикаторе над прокаленным
хлористым кальцием.
На пластинку со слоем сорбента микропипеткой наносят 0,2 мл раствора.
Фитотоксические вещества наносят на расстоянии 1,5 см от нижнего края
пластинки. Чтобы не повредить слой сорбента, раствор фитотоксических
веществ наносят небольшими каплями, не касаясь кончиком пипетки
поверхности сорбента. Линию нанесения периодически подсушивают струей
воздуха. После нанесения необходимого количества фитотоксических веществ
пластинки подсушивают воздухом и ставят под
340
небольшим углом в хроматографическую камеру. За 10 мин до разгонки в
камеру наливают 30 мл смеси растворителей. Разделение фитотоксических
веществ продолжается 30-40 мин.
XIII.3.3.4. ГАЗОВАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ [45, 250]
В последние годы все большее значение в изучении сложных природных смесей
приобретает газовая хроматография. В основе газовой хроматографии лежат
законы распределения вещества между двумя фазами, одна из которых
подвижна. Известно несколько вариантов газовой хроматографии. Однако во
всех случаях через слой неподвижной фазы непрерывным потоком проходит газ
(подвижная фаза), который несет анализируемые вещества. Различают газо-
адсорбционную и газожидкостную хроматографию. В газо-адсорбционной
хроматографии в качестве неподвижной фазы используют твердые активные
адсорбенты (уголь, силикагель, молекулярные сита и т. п.). В газо-
жидкостной хроматографии роль неподвижной фазы выполняют жидкости
(динонилфта-лат, дипропионитриловый эфир, парафиновое масло и др.),
нанесенные на инертное твердое тело.
Метод заключается в многократном распределении паров между движущимся с
определенной скоростью газом (10-100 мл/мин) и твердым адсорбентом или
