Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
subtilis у фронта растворителя с Rf 0,87-0,88, второй - у фронта
растворителя и в средней части полосы с Rf 0,50-0,55, третий - в точке
нанесения вещества (вещество в данном растворителе не разгоняется).
Следует отметить, что размер зон угнетения роста Вас. subtilis неодинаков
у разных штаммов фузариев (рис. 115). Это свидетельствует о многообразии
веществ, ингибирующих рост тест-культуры.
Рис. 115. Зоны угнетения роста тест-культуры Вас. subtilis (точки- место
нанесения вещества).
331
XII.5.4.2. ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
Силикагель размельчают в фарфоровой ступке или на шаровой мельнице, затем
просеивают через сито (размер частиц 120 меш). Гипс перед размельчением
просушивают 6 ч при температуре 60° С, размалывают в ступке, просеивают
через такое же сито. Стеклянные пластинки размером 17,5 X 13 см погружают
на сутки в хромовую смесь для обезжиривания, тщательно моют и сушат. Для
каждой пластинки готовят смесь следующего состава: 2,5 г силикагеля, 150
мг гипса, 8 мл воды. Смесь хорошо перемешивают палочкой, быстро выливают
на пластинку, распределяют равномерно стеклянной палочкой, оставляют на
сутки для застывания. На следующий день пластинки для активизации
прокаливают 2 ч в сушильном шкафу при температуре 100° С, наносят на них
0,1 мл исследуемого вещества и производят разгонку в системе
растворителей хлороформ - метанол в соотношении 95 : 5. Пластинки с
разогнанным веществом просматривают в УФ-лучах. Фузариевая кислота при
этом имеет серо-коричневую окраску и Rf 0,92, пятна с зелено-голубым
свечением - Rf 0,55.
XII.5.4.3. БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ФУЗАРИЕВОЙ КИСЛОТЫ
Культуральную жидкость проверяют на наличие фузариевой кислоты следующим
образом. Семена растений проращивают на двойном слое фильтровальной
бумаги, смоченной водой, в чашках Петри 3-4 сут. Проростки помещают в
стаканчики, в которые вносят разные разведения фильтрата. Контролем
служит вода. На протяжении 10 сут наблюдают за развитием растений,
отмечая скорость роста и характер увядания. Обычно используют проростки
хлопчатника как наиболее чувствительное тест-растение. Фитотоксическое
действие фузариевой кислоты проявляется как в отношении корневой системы,
так и стеблей: наблюдается побурение корневого чехлика, потеря тургора в
нем и загнивание под действием нативной культуральной жидкости.
Присутствие фузариевой кислоты в культуральной жидкости часто определяют
по действию на проростки. Для этого семена гороха или кукурузы
раскладывают на увлажненные стерильной водопроводной водой фильтры в
кюветах, накрывают сверху увлажненной фильтровальной бумагой для создания
необходимой влажности и помещают в термостат при температуре 22° С на 2-3
сут. Наклюнувшиеся семена обрабатывают нативной культуральной жидкостью.
В культуральной жидкости семена выдерживают в течение 24 ч, после чего
переносят в чашки Петри со стерильным песком. Проростки поливают
стерильной водопроводной водой в течение 7 сут и производят учет опыта.
Контрольные семена замачивают в воде и помещают в чашки со стерильным
песком. При наличии фузариевой кислоты в культуральной жидкости у
проростков кукурузы и гороха часто развивается основной корень, но не
образуются боковые корни и корневые волоски, или же корневая система
слабо развита и имеет уродливую форму.
XII.5.5. ТОКСИЧНОСТЬ ФУЗАРИЕВОЙ КИСЛОТЫ
Токсичность фузариевой кислоты определяют внутрибрюшинным введением белым
мышам (18-22 г) в остром и хроническом опытах [68]. В остром опыте ЛДШ
препарата составляет 101,5 мг/кг, ЛД50 -
332
88,8 мг/кг. Животные в большинстве гибнут на вторые сутки после введения.
При вскрытии обнаруживают вздутый желудок, увеличенную с округленными
краями темно-вишневого цвета печень, переполненную кровью, набухшие почки
темно-вишневого цвета; сердце несколько увеличено, сосуды переполнены
кровью, легкие полнокровны.
В хронических опытах препарат вводят на протяжении 2 нед в дозе 1,17
мг/животное. При ежедневном введении гибель животных составляет до 50%
после 11 инъекций, а при введении через день - около 25% после 6
инъекций. Это свидетельствует об относительно низкой токсичности
фузариевой кислоты для животных и ее слабых кумулятивных свойствах.
Фузариевая кислота обладает гипотензивным действием, т. е. способностью
снижать артериальное давление. При одноразовом введении фузариевой
кислоты кроликам у них снижается артериальное давление, которое
восстанавливается через 3-4 ч*
XIII. ИЗУЧЕНИЕ ПРИРОДЫ
ФИТОТОКСИЧЕСКИХ
ВЕЩЕСТВ
МИКРОСКОПИЧЕСКИХ
ГРИБОВ
Фитотоксические вещества, вырабатываемые грибами, могут быть кцелотами и
их производными, пептидами, белками, полисахаридами, хцнонами,
гетероциклическими кислород- и азотсодержащими соединениями и другими
веществами. Способы выделения и очистки этих веществ определяются их
химической природой, характером сопутствующих продуктов жизнедеятельности
организма и неиспользованных компонентов среды (углеводы, неорганические
