Люминесцентный анализ - Шлезингер М.А.
Скачать (прямая ссылка):
В ряде работ исключительная чувствительность тиохромного метода использована для решения вопросов биохимического характера.
В работе Елисеевой он применен для определения витамина в моче, крови и тканях [42]. Для устранения мешающего действия флуоресцирующих примесей автор рекомендует обрабатывать исследуемый объект соляной кислотой (при нагревании) и проводить извлечение тиохрома изобутанол ом; предложен метод осаждения белков, почти полностью устраняющий потери тиамина при удалении белков.
Островский [43] для определения витамина Bj в крови остроумно применил метод, аналогичный предложенному Розенталь для определения адреналина: испытуемый раствор добавляют к раствору окислителя K3Fe(CN)6; минимальная концентрация витамина, при которой еще заметна флуоресценция на границе двух слоев, 0,01 -у в мл. Определяя раз-давление, при котором свечение еще появляется, находят содержание витамина (ср. гл. VI).
Запрудская [44] модифицированным тиохромным методом определяет содержание витамина Вх в участках нервной системы (на кошках и кроликах). Мягкое окисление витамина Вх в тиохром осуществимо, по-видимому, в тканях и без его извлечения; благодаря этому оказывается возможным следить за локализацией витамина. Так, Мюлар [45] считает возможным наблюдать в нервных тканях флуоресценцию тиохрома, образующегося при окислении; на основании проведенных наблюдений он приходит к определенным выводам относительно локализации витамина.
Продолжаются работы по уточнению методов определения витаминов Bi и В2 [46] в многокомпонентных системах.
Никотиновая кислота и ее производные. Флуоресцентные наблюдения были широко использованы Наяром с сотрудниками в целях выяснения, что именно собой представляет флуоресцирующее вещество F2, выделение которого человеческим организмом находится в связи
206
Б. ЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ АНАЛИЗ В БИОЛОГИИ И ОРГ. ХИМИИ [ГЛ. XII
с принятием никотиновой кислоты; выделение этого вещества не наблюдается у больных пеллагрой и у животных, больных black tongue. Авторы показывают, что F2 не может быть амидом метилникотиновой кислоты, синтезированным Гуффи и Пертрум, так как растворы этих соединений не обладают флуоресценцией.
На основании сопоставления флуоресценции производных амида никотиновой кислоты и на основании ряда других соображений авторы приходят к выводу, что F2, получаемый из элуатов (из мочи) после обработки щелочью и бутиловым спиртом, представляет собой бутиловый эфир амида а-карбинола метилникотиновой кислоты [47].
Флуоресцирующим веществам, выделяемым с мочой в связи с принятием никотиновой кислоты, посвящен и ряд других работ [48].
В [49] описан количественный люминесцентный метод определения '-метилникотинамида как одного из главных продуктов метаболизма никотиновой кислоты. Метод основан на получении флуоресцирующих продуктов взаимодействия с кетонами.
Черкес [50] люминесцентным методом путем визуального сравнения со стандартом определял содержание N'-метилникотинамида в моче морских свинок. Показано, что организм голодающих морских свинок приобретает способность амидировать *) никотиновую кислоту.
Витамин А. Провитамин А, каротин, из которого путем расщепления образуется витамин А, обл'адает флуоресценцией желто-зеленого цвета. Согласно данным ряда авторов, витамин А ни в растворе, ни в свободном состоянии не флуоресцирует. Тем не менее имели место попытки определять содержание витамина А в жирах и животных тканях на основании наблюдений их флуоресценции [51].
Работы Соботка с сотрудниками, относящиеся к 1943-1944 гг., выясняют до некоторой степени вопрос о возможности определения витамина А люминесцентным методом [52]. Согласно данным этих авторов, эфиры витамина А при облучении ультрафиолетовым светом начинают флуоресцировать под влиянием протекающей при этом фотохимической реакции. Интенсивность флуоресценции вначале возрастает, затем при дальнейшем облучении начинает спадать, и в конечном счете свечение гаснет,очевидно, тоже в результате фотохимической реакции, но уже иной. В полярных растворителях (спиртах) витамин А, подобно его эфирам, при засвечивании ультрафиолетовым светом обнаруживает сначала возрастание флуоресценции, а затем полное ее исчезновение. В растворителях слабо полярных - в эфире, хлороформе, бензоле - наблюдается незначительное снижение флуоресценции витамина А, если его облучать ультрафиолетовым светом; при хранении в темноте интенсивность флуоресценции остается постоянной. Авторы считают, что в пределах концентраций 0,1-5,0 мг/мл интенсивность флуоресценции раствора пропорциональна содержанию витамина. Просасыванием азота или углекислого газа через раствор витамина А можно снизить концентрацию кислорода в нем; при этом уменьшается спад интенсивности свечения. Соботка и его соавторы приводят спектры абсорбции флуоресцирующего продукта, получаемого из витамина А при его облучении ультрафиолетовым светом, и высказывают предположения относительно его химической природы. Таким образом, по-ви-
/\- conh2.
*) Т. е. переводить никотиновую кислоту в ее амид, в соединение
