Люминесцентный анализ - Шлезингер М.А.
Скачать (прямая ссылка):
Окисление протекает сравнительно медленно в растворах адреналина в спирте при концентрации порядка 5-10'5 г/мл и содержании NaOH примерно пятикратном по весу по сравнению с адреналином. Ход кривой нарастания и потом спадания яркости свечения легко измерить путем сравнения со свечением раствора эталона, например эозина. Максимальная интенсивность свечения сохраняется сравнительно длительный период времени (порядка десяти минут). У растворов разных концентраций, но приготовленных из одного и того же исходного препарата адреналина, наблюдаются интенсивности свечения в максимуме пропорциональные концентрации раствора. Такая зависимость не самоочевидна, так как максимальная интенсивность флуоресценции отображает то состояние наблюдаемой системы, при котором скорость образования адреналина {флуоресценцию которого мы наблюдаем) равна скорости его последующего
ОН
*) Формула адреналина: НО,х j- СН
НО^/1 CH2NH(CH3).
1]
БИОЛОГИЧЕСКИ ВАЖНЫЕ ВЕЩЕСТВА
209
изменения. Для проверки возможности использовать описываемый люминесцентный метод для стандартизации выпускаемых препаратов адреналина были измерены кривые "яркость - время" для препаратов (ампул) адреналина заведомо разного качества: адреналина 1938 г. в ампулах желтого стекла, 1941 г. в бесцветных ампулах, адреналина 1948 г., любезно предоставленного нам мясокомбинатом, и адреналина из ампул, купленных в аптеке (1949 г.). Сопоставление полученных кривых показало, что максимум интенсивности флуоресценции для адреналина 1949 г. лежит много выше, чем для всех остальных, что адреналин 1938 г. в ампуле желтого стекла разложился меньше, чем препарат 1941 г., и что нарастание интенсивности свечения протекает у недоброкачественных препаратов быстрее, чем у хороших. По-видимому, продукт окисления в начальной стадии играет роль катализатора дальнейшего процесса. На это указывал и Утевский с сотрудниками. Для суждения о возможности замены дорогостоящего биологического метода стандартизации препаратов люминесцентным методом необходимо провести параллельно стандартизацию препаратов адреналина обоими методами.
Люминесцентный метод определения адреналина в крови связан со специфическими трудностями [66], делающими эти определения довольно сложными. Упрощенный быстрый полуколичественный метод предложен Розенталем [67], [68]: в пробирку наливают около 1 мл исследуемой жидкости и подслаивают примерно такой же объем водной смеси из 4 объемов насыщенного раствора хлористого натрия и 1 объема 30%-ного раствора едкого натра. Наличие адреналина устанавливают по флуоресценции пограничного слоя, отчетливо выявляющейся, когда на пробирку падает сходящийся горизонтально направленный пучок ультрафиолетовых лучей; наблюдения проводят через 1-2 минуты после подслаивания. Для количественного определения содержания адреналина устанавливают предельное разбавление, при котором еще получается флуоресцирующее зеленоватое кольцо в пограничном слое (см. гл.VI, стр. 90). Для ампулированных растворов адреналина (1 : 1000) предельное разбавление найдено равным 1 : 200 000 000, что соответствует концентрации 0,005 у /мл; следовательно, при предельном разбавлении исследуемых биологических жидкостей содержание адреналина и в них такое же. Для определения адреналина в крови целесообразно исследовать сыворотку, разбавляя ее в два или три раза дистиллированной водой или лучше 1%-ным раствором борной кислоты; нормальное содержание адреналина в крови найдено равным 0,03 у!мл. Наблюдения люминесценции используют для изучения процессов окисления адреналина и его производных [69], для раздельного определения адреналина и норадреналина [70], а также артер-нола [71].
Для большинства рассмотренных биологически важных веществ и для многих других применен также метод бумажной разделительной хроматографии с использованием наблюдений люминесценции, для обнаружения "пятен" компонентов анализируемого объекта (см. гл. V, стр. 63). Так, этим путем определено содержание флуоресцирующих компонентов - рибофлавина, фолиевой- кислоты и др. в мальпигиевых сосудах и крови гусеницы шелкопряда [72], а также их химические изменения при болезнях шелкопряда [73]; установлено, что большая часть витамина Вх выделяется человеком в виде аневринкарбоновой кислоты [74]; исследованы продукты метаболизма триптофана из кусочков печени крыс [75]; уточнено содержание в моче и форма выделения порфиринов [76], а также 4-пири-доксиловой кислоты [77], 2-5-диоксибензойной кислоты [78] и желчных
14 Люминесцентный анализ
210 Б. ЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ АНАЛИЗ В БИОЛОГИИ И ОРГ. ХИМИИ [ГЛ. XXI
кислот [79]. Метод хроматографирования на бумаге применен для обнаружения присутствия адреналина (10 мг и меньше) [80], для изучения производных никотиновой кислоты [81], аденозин фосфорных кислот [82], аминокислот [83] и т. д.
Мы рассмотрели основные группы биологически важных веществ, для качественного и количественного определения которых разработаны методы химического люминесцентного анализа.
Данные, приведенные нами в этом разделе, отчетливо показывают, насколько эффективным оказался метод химического люминесцентного анализа. Это видно и из обзора работ по люминесцентному анализу за 1955-1957 гг. [84].
