Люминесцентный анализ - Шлезингер М.А.
Скачать (прямая ссылка):
Дикарбоновые кислоты с гидроксильными группами по соседству с карбоксильными под действием серной кислоты отщепляют СО и конденсируются с резорцином, образуя умбеллиферон и его гомологи,- соединения, флуоресцирующие синим светом.
Групповая реакция на алифатические амины. В отличие от ароматических аминов, алифатические образуют при сплавлении с флуорес-цеинхлоридом в присутствии хлористого цинка красители ряда родамина. Цвет флуоресценции продукта сплавления: желтый для первичных аминов и оранжевый для вторичных. Таким образом, эта реакция позволяет не только отличить алифатические амины от ароматических, но и установить их природу: первичные они или вторичные.
По данным Гайтингера, открываемый минимум для диэтиламина и пиперидина равен 4 у, для других аминов - от 10 до 30 у.
Аналогично с алифатическими аминами реагируют с флуоресцеинхлоридом амиды и нитрилы кислот. Реакция полезна для обнаружения сахарина в консервах.
Количественный флуоресцентный метод определения пировиноградного альдегида [94]._ Метод основан на реакции взаимодействия пировиноградного альдегида с гомотропной кислотой (4,5-диоксинаф-
35
ОПИСАНИЕ ОТДЕЛЬНЫХ РЕАКЦИЙ
213
талин-2,7-дисульфоновая кислота); в концентрированной серной кислоте при этом образуется желтый растворимый продукт конденсации неизвестного состава, обладающий яркой флуоресценцией зеленого цвета, возбуждаемой в сернокислотном растворе светом в интервале длин волн 380-510 ммк.
Пропись реакции: в три колбы емкостью 25 мл каждая со стеклянными пробками наливают по 1 мл анализируемого раствора с содержанием пировиноградного альдегида от 0,5 до 2 мг, стандартного раствора и дистиллированной воды (для слепого опыта), доливают по 1 мл свежеприготовленного 2%-ного раствора гомотроповой кислоты и затем, при охлаждении, по 10 мл охлажденной (льдом) концентрированной серной кислоты (уд. вес 1,84). Температура смеси не должна превышать 25°. Охлаждают колбы ледяной водой, затем нагревают 5 мин. на водяной бане при 50° и быстро охлаждают до комнатной температуры. Добавлением концентрированной серной кислоты доводят объем до 25 мл и измеряют интенсивность флуоресценций полученных растворов.
Стандартные растворы для сравнения готовятся разбавлением исходного раствора, получаемого перегонкой 1 г глицеринового альдегида с 24 мл 1 мол серной кислоты с поледующим разбавлением 15 мл полученного дистиллята 100 мл воды; такой исходный раствор содержит 2-5 г/л пировиноградного альдегида; его хранят при 5°; точную его концентрацию определяют осаждением дисемикарбазона.
На результаты определения влияют формальдегид, диацетил, ксилоза, глюкоза и фруктоза.
Определение оксиацетона [95]. Для количественного определения оксиацетона использована яркая синяя флуоресценция 3-гидрокси-хинальдина, образующегося при конденсации оксиацетона с о-аминобензальдегидом.
Пропись реакции: в мерную колбу на 25 мл к 1 мл анализируемого раствора с содержанием оксиацетона от 0,30 до 6 мг добавляют 1 мл аминобензальдегидного реактива и затем 5 мл 0,2 н NaOH; колбу погружают в кипящую водяную баню, нагревают 30 мин., быстро охлаждают холодной водой, добавляют 2 мл 0,5 н НС1 и 5 мл буферного раствора с рН=6,6; разбавляют водой до метки и измеряют интенсивность свечения. Параллельно проводят слепой опыт.
Для изготовления реактива растворяют 50 мг о-аминобензальдегида в 25 мл НС1 (уд. вес 1,19), нейтрализуют при охлаждении NaOH до рН=7 и доливают водой до 25 мл.
Такие вещества, как диацетил и фурфурол, значительно снижают интенсивность свечения и тем самым затрудняют использование метода при решении некоторых проблем химии углеводов.
Определение бензила [96]. Метод основан на реакции конденсации дикетонов (бензила) с алкилированными аминофенолами (с m-диэтиламинофенолом); в результате образуется флуоресцирующее соединение. Для устранения влияния pH среды на измеряемую интенсивность свечения анализируемого спиртового раствора последний нейтрализуют. Зависимость интенсивности флуоресценции от концентрации бензила выражается прямой вплоть до концентрации 0,03 мг1мл.
Определение содержания 2-н итронафталина в 1-н и т-ронафталине [97]. Нитронафталин сульфируют серной кислотой, восстанавливают (цинковой пылью или иным металлом), разбавляют до нужного объема и обязательно фильтруют, так как даже в растворах, кажущихся прозрачными, взвешенные частицы цинка влияют на интенсивность свечения; pH раствора должен быть 4,6; в качестве буфера применяют уксуснокислый натрий. При возбуждении ближним ультрафиолетовым светом (365 ммк) Р-изомер ярко люминесцирует синим светом (~450 ммк), а-изомер - зеленоватым (-510 ммк); при измерении интенсивности флуоресценции p-изомера зеленое свечение а-изомера ослабляют с помощью светофильтра. Кроме того, условия сульфирования подобраны так, что около 95-100% 1-нитронафталина разрушаются, содержание же 2-нитронафталина остается неизменным; этим повышается чувствительность метода.
Пропись реакции сульфирования: к охлажденному раствору 0,1 г образца в 1 .ил 100%-ной серной кислоты добавляют 2 мл 60% олеума и прогревают 5 мин. на водяной бане. Полученный раствор обесцвечивают порошком угля; необходимо после отфиль-тровывания угля тщательно его промыть подкисленной водой (2 мл 95%-ной серной кислоты на 1 л) для извлечения сульфокислоты, которая могла удержаться на угле вместе с примесями. Стандартные растворы готовили из очищенного 2-аминонафталина путем его сульфирования; содержание сульфокислоты в получаемых растворах устанавливалось потенциометрически.
