Жидкостная хроматография при высоких давлениях - Энгельгардт Х.
Скачать (прямая ссылка):
Если сконцентрировать нужные компоненты пробы не представляется возможным или если даже после сконценгрирования чувствительность недостаточна, то ее можно повысить, уменьшая степень разбавления пробы в процессе разделения. Мы не будем обсуждать вопросы повышения чувствительности детекторов за счет
230
Глава XI
уменьшения шумов, подбора рабочей длины волны, толщины слоя и т. д.
Чтобы провести разделение, необходимо определенное число теоретических тарелок. Поскольку разбавление зависит от длины колонки или времени пребывания компонентов пробы в разделительной колонке, то для анализа микропримесей следует использовать как можно более короткие колонки с необходимым числом тарелок Высота тарелки уменьшается с уменьшением радиуса частиц, поэтому анализ микропримесей целесообразно вести на колонках, заполненных частицами как можно меньшего размера. При этом необходимое число тарелок получают в значительно более коротких колонках, в которых из-за меньших t0 наблюдается меньшее разбавление. Высота тарелки зависит от линейной скорости элюента, поэтому при анализе следует выбирать скорость потока, соответствующую минимальной высоте тарелки, т. е. проводить разделение при hMm, имт, «макс- Разделительную способность в этом случае оптимизируют за счет времени анализа.
Времена удерживания следует подбирать таким образом, чтобы значения к' были небольшими, так как иначе будут получаться широкие пики.
Разделительная способность не зависит от внутреннего диаметра колонки, если и узкие, и широкие колонки заполнены одинаково хорошо, а размывание при этом тем меньше, чем меньше внутренний диаметр колонки, т. е. площадь поперечного сечения г2п, по которой распределяется проба!
В литературе подробно обсуждается влияние этих параметров на пределы чувствительности [9, 10].
Таким образом, для’ определения микрокомпонентов следует использовать как можно более короткие разделительные колонки, заполненные частицами наименьшего размера. Внутренний диаметр колонок должен быть наименьшим из возможных, а скорость элюента должна соответствовать имин. Систему следует подбирать таким образом, чтобы значения к' были оптимальными, т. е. лежали в пределах 1,5-4. Если работа ведется с сильно разбавленными растворами и не нужно опасаться, что колонка окажется перегруженной, то можно увеличивать объем пробы до тех пор, пока пик исследуемого вещества не станет заметно размываться.
Если проба, в которой следует определить микрокомпоненты, имеется в неограниченном количестве, то диаметр колонки не играет никакой роли [17]. Величину пробы можно увеличивать до границы предельной допустимой нагрузки, а в тех случаях, когда селективность разделительной системы для отделения микрокомпонентов достаточно велика, нагрузку можно увеличивать и больше, жертвуя разделением.
Специальные методы разделения
231
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Wolf 111 J. P., Anal. Chem., 45, 1248 (1973).
2. De Stefano J. J., Beachell H. C., J. Chromatogr. Sci., 10, 654 (1972).
3. Kaiser R., Gas-Chromatographie, Bd. IV, Quantitative Bestimmung. Mannheim, Bibliograph. Inst.
4. Ettre L. S., Zlatkis A. (Eds.), Practice of Gas Chromatography. New York, Interscience, 1967.
5. Karger B. L, Barth H., Dallmeier ?., Couttois G., Keller H. ?., J. Chromatogr., 83, 289 (1973).
6. Halasz /., Anal. Chem., 36, 1428 (1964).
7. Сильверстейн P. Спектрофотометрическая идентификация органических соединений. — М.: Мир, 1977, 590 с.
8. Kortim G., Kolorimetrie-Photometrie und Spektrometrie. 4. Aufl. Berlin — Gottingen — Heidelberg, Springer, 1962.
9. Meijers С. A. М., Hulsman J. A. R. J., Huber J. F. K., Z. Anal. Chem., 261, 347 (1972).
10. Karger B. L., Martin M., Guiochon G., Anal. Chem., 46, 1640 (1974).
11. Wehrli A., Z. Anal. Chem., 277, 289 (1975).
12. Larmann J. P., Williams R. C., Baker D. R., Chromatographia, 8, 92 (1975).
13. Attebery J. A., Chromatographia, 8, 121 (1975).
14. Godbille E., Devaux P., J. Chromatogr., 122, 317 (1976).
15. Gonroe K., Chromatographia, 8, 119 (1975).
16. Wehrli A., Hermann U„ Huber J. F. K„ J. Chromatogr., 125, 59 (1976).
17. Halasz I., Endele R., Asshauer J., J. Chromatogr., 112, 37 (1975).
Глава XII ОЧИСТКА РАСТВОРИТЕЛЕЙ
При разделении с помощью жидкостной хроматографии плохая воспроизводимость результатов чаще всего обусловлена недостаточной чистотой растворителей, используемых в качестве элюентов. Загрязнения накапливаются в разделительной колонке, что может привести к искажению результатов определения. Этот вопрос подробно обсуждается в гл. VI. Незначительные следы полярных примесей, таких, как вода, спирт и т. д., меняют свойства разделительной системы, особенно если разделение проводится методом адсорбционной хроматографии.
Желательно, чтобы все элюенты перед применением были перегнаны, особенно если после разделения проба должна быть вновь выделена. В противном случае нелетучие компоненты элюента могут загрязнить пробу. При градиентном элюировании примеси, содержащиеся в неполярном элюенте, могут концентрироваться на колонке. При переходе к более сильным элюентам эти примеси элюируются в виде острых зон, которые ошибочно можно принять за компоненты пробы. На рис. XII. 1 показан пример такого разделения (нижняя хроматограмма).
