Жидкостная хроматография при высоких давлениях - Энгельгардт Х.
Скачать (прямая ссылка):
Структурный параметр Хроматографическая система разделения
I адсорбционная с обращенной1 фазой распределитель- ная а ионообменная ситовая
Размер молекулы + + + + +
Изомеры
Цепь — кольцо (+) + + +
Разветвление с одинаковым числом С (+) + + (+) (+)
Стерические (цис — транс) + + + + +
Оптические - - - -
Число двойных связей + + + + +
Положение двойной связи + + + +
Гомологический ряд + + + + + ¦
Заместители (число и положение)
Неполярные (алкил, галоген) + + + + + + +
Средней полярности (нитрокарбонильная, + + + + +
эфирная группа)
Полярные (фенолы, спирты, амины, амиды) + + + + + ,(+)
Сильнополярные (кислотные или основ- (+) + + + + + +
ные группы)
а Только для чисто водных систем.
218
Глава X
неподвижной фазы на силикагель с небольшой удельной поверхностью или ППМ, можно получить полное элюирование и для менее полярных элюентов.
Если полярные смеси растворителей элюируют не все компоненты пробы, то адсорбционную систему можно постепенно перевести в распределительную систему, вводя полярные добавки, например воду, до насыщения неполярных элюентов или получая тройные смеси, например хлористый метилен, спирт, вода. Как об этом подробно говорилось в гл. VII, в этом случае в порах твердого тела благодаря преимущественной адсорбции полярных компонентов элюента образуется неподвижная жидкая фаза. Скорость образования жидкой разделительной фазы зависит от свойств твердой фазы и состава элюента. Чтобы убедиться в постоянстве состава фазы, вводят пробу повторно и определяют значения к' или относительное удерживание.
Распределительная хроматография занимает промежуточное положение между адсорбционной хроматографией и хроматографией на обращенных фазах. Распределительные системы предпочтительны при разделении членов гомологического ряда. Такое разделение можно провести и в системах с обращенной фазой. Методом адсорбционной хроматографии можно разделить только низшие члены гомологического ряда. Оптические изомеры удается разделить только в форме пар диастереомеров (см. рис. VI.21), что в общем не представляет трудностей. Для расщепления рацематов в принципе пригодны оптически активные подвижные фазы. Подобные фазы для классической колоночной хроматографии известны только в форме производных целлюлозы [2, 3], для жидкостной хроматографии при высоком давлении они не пригодны. Область применения ионообменной хроматографии ограничена, так как использовать можно лишь чисто водные системы. В таких системах можно разделять те ионы или соединения, которые легко и обратимо образуют комплексы (обмен лнгандов) с ионами, связанными с ионообменником. Кроме того, на органической матрице ионообменника может также происходить неионообменная сорбция. Если в системах с ионообменниками к водным элюенгам добавляют органические растворители, то элюенты разделяются и образуется распределительная система. Если бы дополнительно учитывали обе эти возможности разделения на ионообменниках, то возможности использования этого метода были бы более многообразны, чем это следует из табл. Х.1.
Основное назначение ситовой хроматографии - разделение молекул по размерам, хотя во всех рассмотренных до этого системах возможен эффект исключения. Например, исключение может происходить в полярных элюентах, когда у относительно небольших молекул образуется настолько большая сольватная оболочка, что они не могут войти в поры, хотя этого нельзя ожидать, если исходить только из величины их молекул.
Выбор разделительной системы
219
Если о составе пробы известно мало, то может оказаться полезным исследовать пробу методом ситовой хроматографии с целью определения молекулярно-массового распределения компонентов пробы. Полярные полимеры, например белки, проявляют тенденцию к необратимой сорбции, поэтому опознать их не удается или же они меняют разделительные свойства колонки. Имея представление о молекулярной массе пробы, легче выбрать разделительную систему.
При проведении разделений всегда встает вопрос: все ли компоненты пробы вымыты или некоторые из них удерживаются настолько сильно, что их пик маскируется шумами нулевой линии? Решить этот вопрос очень сложно. Можно попытаться многократно разделить одну и ту же пробу в различных системах, однако проще всего сначала увеличить элюирующую силу элюента и проследить за изменением положения и числа элюированных пиков. Окончательно решить вопрос о том, элюированы ли и очень сильно удерживаемые составные части пробы, можно только после разделения в системе с обращенными фазами. Если первоначальное разделение проводилось в системе с полярной неподвижной фазой (например, с силикагелем), то в таких условиях прочнее всего удерживаться должны высокополярные компоненты. В системе с обращенной фазой, где неподвижная фаза неполярная, эти компоненты почти не удерживаются или удерживаются очень слабо, поэтому можно установить их наличие. Все сказанное справедливо и в том случае, когда разделение сначала проводят в системе с обращенной фазой. При этом рекомендуется перейти от системы с обращенной фазой к адсорбционной системе.
