Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Химия -> Энгельгардт Х. -> "Жидкостная хроматография при высоких давлениях " -> 86

Жидкостная хроматография при высоких давлениях - Энгельгардт Х.

Энгельгардт Х. Жидкостная хроматография при высоких давлениях — М.: Мир, 1980. — 250 c.
Скачать (прямая ссылка): jidkostnayahromatografiya1980.djvu
Предыдущая << 1 .. 80 81 82 83 84 85 < 86 > 87 88 89 90 91 92 .. 94 >> Следующая

Совершенно другой принцип положен в основу коммерческих препаративных жидкостных хроматографов. Эти приборы рассчитаны на достижение максимальной производительности при минимальных затратах. Этого добиваются за счет снижения качества разделения. Разделительные колонки выпускаются в виде полиэтиленовых гильз с внутренним диаметром 5 см, заполненных дешевым силикагелем с большим размером частиц (50—100 мкм). Гильзы достаточно просто вставляются и извлекаются из кассеты для такой колонки. Оптимальная плотность упаковки достигается благодаря радиальному сжатию колонки в кассете, что дополнительно улучшает разделительную способность системы. Поскольку необходимый перепад давления сравнительно мал, даже простые насосы позволяют подавать элюент в колонку со скоростью 50 — 500 мл/мин. На
15 Заказ 82S
226
Глава XI
такой колонке можно довольно легко разделить пробу в несколько граммов. При этом, безусловно, не нужны ни предварительная очистка, ни предварительное удаление не элюируемых компонентов пробы, например белковых веществ в биологических материалах и т. д.
По сравнению с высококачественным аналитическим разделением такой подход предпочтителен прежде всего в тех случаях, когда необходимо отделить друг от друга относительно немного компонентов, как, например, при препаративном выделении соединений органического синтеза и т. п.
При препаративных работах пробу можно вводить с помощью шприца или петли для ввода пробы. Более разбавленные растворы вводят преимущественно последним способом. Дополнительным размыванием полосы при препаративных работах можно пренебречь. Иногда при препаративных работах возникают трудности, связанные с вводом пробы и равномерным распределением пробы по всему сечению колонки. Прежде всего в этом случае уже несправедливо эмпирическое правило, согласно которому раствор пробы при вводе должен быть как можно более концентрированным. Авторы работы [2] показали, что при одинаковом количестве пробы разбавленные растворы дают меньшее размывание полосы, чем концентрированные растворы. Это можно объяснить местными перегрузками разделительной системы.
По этой причине, а также из-за ограниченной растворимости составных частей пробы в элюенте при определенных условиях приходится вводить относительно большой объем пробы. Объем пробы влияет на форму пика, только если он становится больше стандартного отклонения колонки (в единицах объема), вызванного процессом смешения внутри колонки [16]. Стандартное отклонение колонки можно легко определить из ширины пика у основания (w = 4ст) на хроматограмме на ленте самописца (ст, измеряется в секундах) и из объемной скорости. У обычных разделительных колонок, заполненных силикагелем с диаметром частиц примерно 10 мкм, это объемное стандартное отклонение составляет 50—150 мкл. При больших объемах проб гауссова кривая переходит в прямоугольный пик. Из-за увеличения площади пика, обусловленного увеличением объема пробы, разделение двух соседних пиков ухудшается, даже если это не вызвано большой нагрузкой колонки.
Как правило, обычные детекторы для препаративного разделения слишком чувствительны. У фотометрических детекторов необходимую чувствительность подобрать очень просто: нужно уменьшить толщину слоя раствора в ячейке. Конечно, у некоторых детекторе» увеличение расхода элюента приводит к колебаниям нулевой линии и увеличению шумов. Отводная трубка детектора должна быть как можно короче и шире для того, чтобы при большой скорости элюента окошки ячейки не находились под слишком большим давлением и чтобы это не привело к разрушению ячейки.
Специальные методы разделения
227
Итак, препаративные работы можно проводить на дорогостоящих дающих хорошее разделение аналитических приборах, используя колонки, заполненные носителем с малым диаметром частиц, и на сравнительно дешевых колонках с посредственной разделительной способностью. Какое из этих направлений победит, пока еще сказать нельзя. Заметим только, что производительность, которой нельзя пренебрегать при препаративных разделениях, не зависит от размеров частиц, если условия работы идентичны.
Б. Количественный анализ
Жидкостная хроматография при высоком давлении, как и все хроматографические методы, позволяет провести не только качественный, но и количественный анализ. Как и во всех хроматографических методах, в данном случае площадь пика также пропорциональна величине введенной пробы. Выбор способа определения площади пика зависит от имеющегося опыта. Как и в газовой хроматографии [3, 4], можно рассчитать площадь пика, умножив высоту пика на ширину его на половине высоты, можно также определить площадь с помощью дискового интегратора или электронного интегратора или с помощью компьютера [5]. Ошибки в результатах измерения площади составляют от 1 до 5% и при графическом определении зависят от навыка экспериментатора.
Причины ошибок частично уже известны из газовой хроматографии. Так, если пробу вводят в колонку шприцем, то из-за высокого противодавления трудно добиться того, чтобы введенные количества раствора были строго одинаковыми. Если шприц применяется длительное время, то большая часть вещества может выдавиться противодавлением по поршню. При точных количественных исследованиях и прежде всего при серийных анализах используют петлю для ввода пробы, так как воспроизводимость результатов при этом выше. При введении пробы с помощью шприца всегда следует использовать «внутренний стандарт», чтобы исключить ошибку, связанную с вводом пробы. В качестве внутреннего стандарта к пробе добавляют точно известное количество вещества, не содержащегося в исходной смеси. Это контрольное вещество по возможности следует выбирать таким образом, чтобы оно элюировалось на «пустом» месте хроматограммы, полученной до его введения. Путем отнесения результатов к площади этого стандарта компенсируют ошибку, обусловленную введением пробы с помощью шприца. Причиной ошибки, связанной с процессом хроматографического разделения, часто является неполное элюирование пробы; по этой причине сумма площадей определенных пиков, принимаемая за 100%, может быть оши-
Предыдущая << 1 .. 80 81 82 83 84 85 < 86 > 87 88 89 90 91 92 .. 94 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed