Жидкостная хроматография при высоких давлениях - Энгельгардт Х.
Скачать (прямая ссылка):
Эти соображения справедливы исключительно для хроматографии на полярных неподвижных фазах (Si02, А1203). К сожалению, в настоящее время еще не существует пригодных для практических целей систем, которые позволяли бы проводить разделение на обращенных фазах методом ТСХ.
В табл. Х.2 еще раз приведены характеристики рассмотренных систем и указаны важнейшие правила выбора систем и способа влияния на удерживание проб [1].
Выбор разделительной системы
223
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Hesse G., Chromatographisches Praktikum. Frankfurt/Main, Akad. Verlagsge-sellschaft, 1968.
2. Luttringhaus A., Hess U., Rosenbau H. J., Z. Naturforsch., 22b, 1296 (1967).
3. Hesse G., Hagel R., Chromatographia, 6, 277 (1973).
4. Geiss F., Parameter der Dunnschicht-Chromatographie. Braunschweig, Vieweg, 1972.
5. Engelhardt H., Engel B., Chromatographia, 1, 490 (1968).
Глава XI
СПЕЦИАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ РАЗДЕЛЕНИЯ
А. ПРЕПАРАТИВНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
Препаративным разделением обычно называют анализы, в которых величина пробы составляет от 10 мг до нескольких граммов. Такие разделения можно проводить на обычных приспособленных для аналитических разделений приборах. Для многих современных методов исследований достаточно 10—100 мг вещества.
Препаративное разделение можно проводить, только если получено хорошее аналитическое разделение при такой величине пробы, которая соответствует линейной области, т. е. при максимальной нагрузке 10“4—10~3 г пробы на грамм неподвижной фазы. Как известно, максимальная предельная нагрузка (см. гл. VI, разд. I.A, и рис. VI .2) равна тому максимальному количеству пробы, при котором разделение на определенной колонке происходит без ухудшения ее разделительной способности. На обычных аналитических колонках (внутренний диаметр 3-4 мм и длина 30 см) можно легко разделить пробу примерно в 1 мг. Для многих дорогостоящих природных веществ это уже «препаративное» количество. При аналитическом разделении (когда величина пробы соответствует линейной области), меняя условия разделения, можно оптимизировать разделение таким образом, что расстояние между пиками станет очень большим. Само собой разумеется, что при этом длительность анализа увеличивается. Если пики удалены друг от друга достаточно далеко, то пробу можно увеличить. Хотя пики при этом станут шире, перекрывания зон веществ тем не менее не произойдет из-за лучшего разрешения. Таким образом можно на аналитических хроматографических колонках разделять «препаративные» количества веществ от 5 до 100 мг. Следует только учесть, что с увеличением пробы время удерживания становится меньше. При очень больших пробах элютивная хроматография может перейти в вытеснительную хроматографию (ср. гл. I): пик одного компонента при определенных условиях вытесняется из колонки пиком следующего за ним второго компонента. В этом случае зоны элюируемых соединений больше не разделены зонами чистого элюента.
Увеличивая диаметр колонки, можно увеличить пробу разделяемого вещества; однако, чтобы получить ту же самую линейную скорость элюента на колонке с вдвое большим диаметром, скорость подачи элюента необходимо увеличить вчетверо. Максимальная производительность насосов, используемых в жидкостной хроматогра-
Специальные методы разделения
225
фии при высоком давлении, составляет обычно 10—15 мл/мин, поэтому увеличивать диаметр колонки можно в определенных пределах — до 8 — 10 мм. Разделительная способность подобных колонок полностью соответствует разделительной способности аналитических колонок. Незначительное модифицирование аналитических приборов позволяет проводить разделение на более широких разделительных колонках (до 25 мм) [1, 11 — 14]. Колонки большего диаметра невыгодны, так как узкие фракции мелких частиц адсорбентов относительно дороги. Путем автоматизации и непрерывного повторения анализа на тонких колонках можно разделить такие же количества веществ, как и на широких колонках. В продаже имеются приборы для автоматических препаративных разделений, снабженные коллектором фракций и приспособлением для автоматического ввода пробы, которое управляется программным устройством. С помощью этих приборов можно не только собирать отдельные фракции, но и в заданный момент вновь автоматически вводить пробу. Однако автоматизировать анализ можно лишь при условии, что параметры разделений длительное время остаются постоянными. Мы не будем больше касаться технической стороны проблемы. Многократное препаративное разделение небольших проб на аналитических колонках или колонках с несколько увеличенным внутренним диаметром (до 10 мм) в настоящее время, по-видимому, следует считать наилучшим решением, так как для такого разделения пригодно большинство выпускаемых аналитических хроматографов.
Для уменьшения расхода элюентов и разделяющих материалов можно воспользоваться методом рециркуляции, часто применяемым в ситовой хроматографии для увеличения числа разделительных тарелок. В этом случае колонку можно нагрузить значительно сильнее, так как протекающая проба разбавляется. Рециркуляцию можно проводить до тех пор, пока наиболее быстрый пик не догонит наиболее медленный. При подаче элюента с выхода колонки на вход в насосе не должно происходить значительного смешивания, приводящего к размыванию полос.
