Жидкостная хроматография при высоких давлениях - Энгельгардт Х.
Скачать (прямая ссылка):
15*
228
Глава XI
бочной. Этот источник ошибок можно исключить, если проводить измерения в двух независимых друг от друга системах.
Показания детекторов в жидкостной хроматографии при высоком давлении пропорциональны^концентрациям [6]. С помощью самописца регистрируют изменение концентрации как функцию времени. При количественном анализе, измеряя площади, интегрируют кон-
центрацию по времени Для того чтобы получить интере-
сующую величину массы (г), площадь пика следует умножить на скорость потока (см3/с). Поэтому количественный анализ, основанный на измерении площадей, не может быть точным, если нет гарантии, что скорость потока остается постоянной не только в течение всего анализа, но и во время элюирования одного пика. У всех коммерческих приборов постоянство скорости потока гарантируется с точностью ± 1%. Если концентрации компонентов пробы рассчитываются по высоте пиков, то необходимо обращать внимание на постоянство значений к' или на постоянство объема удерживания.
Показания детекторов в жидкостной хроматографии зависят от типа вещества, поэтому для каждого конкретного соединения следует получить специальную калибровочную кривую. Работая с УФ-детектора ми, необходимо помнить, что литературные значения коэффициентов поглощения нельзя использовать даже в тех случаях, когда детектор работает на той же самой длине волны. Ширина спектральной полосы обычных УФ-детекторов для жидкостной хроматографии при высоком давлении равна 5—15 нм, тогда как в работах обычно приводятся молярные коэффициенты поглощения для полосы 0,5—1 нм. Поэтому коэффициенты поглощения, которыми пользуются при количественной обработке хроматограммы, зависят от типа детекторов или ширины их спектральной полосы. Обычно эти коэффициенты ниже и зависят от формы УФ-полосы поглощения. Для бензола етах = 215 при 255 нм [7]; в то же время при 254 нм при ширине спектральной полосы 10 нм коэффициент поглощения равен ~ 100.
Относительно большая ширина спектральной полосы является причиной ограниченной линейности показаний детекторов для жидкостной хроматографии. Отклонения от закона Ламберта — Бера становятся тем больше, чем круче полоса поглощения [8]. Только у веществ с очень плоским максимумом поглощения отклонением от закона Ламберта — Бера можно пренебречь. Благодаря этим отклонениям линейная область УФ-детекторов ограничена ~ 5 ¦ 102 единицами концентрации. Если необходимо увеличить область концентрации до 103 единиц концентрации, то в области высоких концентраций следует допустить отклонения от линейности до 10% и более.
При количественном анализе из-за зависимости интенсивности поглощения от температуры (прежде всего когда измерения прово-
Специальные методы разделения
229
дят на плече дюлосы поглощения) необходимо термосгатировать колонку и измерительную ячейку. Кроме того, следует соблюдать вое меры предосторожности, известные из фотометрии [8].
В. Анализ микропримесей
Поскольку чувствительность детекторов, используемых в жидкостной хроматографии, ограниченна, часто задача, стоящая перед хроматографистом, состоит в том, чтобы определить микропримеси определенного компонента в смеси. Если даже концентрация вещества в анализируемой пробе' еще достаточно велика для прямого определения, то после разделения из-за разбавления в процессе хроматографического элюирования она становится намного меньше. Поэтому, чтобы все же можно было проводить определение, следует увеличить вводимую пробу. Это не вызывает осложнений, особенно если работа ведется с очень разбавленными растворами, так как колонку при этом не перегружают. Существует правило, что в колонку можно вводить, не вызывая заметного дополнительного размывания полосы, пробу, объем которой не превышает примерно 5% объема колонки. Объем пробы можно увеличить еще больше, если значение к' определяемого вещества приблизительно больше 2 и не нужно определять вещества, элюируемые перед ним. В неподвижной фазе скорость перемещения компонентов вдоль колонки меньше скорости элюента, поэтому при к' >2 проба концентрируется и перемещается по колонке в виде более узкой, чем это отвечает объему введенной пробы, зоны.
Следовательно, разделительную колонку можно использовать для накопления и концентрирования микропримесей. Если в выбранной системе вое нужные компоненты пробы удерживаются очень сильно, то они сконцентрируются в начале колонки. Это может произойти и при неоднократном введении разбавленного раствора пробы, и при прокачивании раствора пробы через колонку. Повышая затем элюирующую силу элюента, можно начать элюировать сконцентрированные таким образом компоненты пробы. Необходимость такого накопления компонентов пробы методом адсорбционной фильтрации (см. гл. I) возникает в тех случаях, когда надо определять очень незначительные количества веществ в большом объеме. Работая с водными растворами, для накопления и концентрирования компоненте» можно использовать системы с обращенной фазой. Если растворитель неполярный, применяют обычную адсорбционную систему с сильно полярной неподвижной фазой.
