Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
10Т1/2 проводится для того, чтобы удалить из зондов все те
последовательности, которые соответствуют видам мРНК, содержащимся как в
клетках 10Т1/2, так и в миобластах. Подобная гибридизация с зондами,
лишенными определенных последовательностей (безбалластная, или
субтрактивная гибридизация), делает зонд более специфичным и позволяет
исключить из анализа большой класс клонов кДНК,
Контроль генной экспрессии 409
которые, как вы предполагаете, не содержат искомого гена.
Б. Клоны класса А содержат кДНК, соответствующие видам РНК, общим для
трех типов клеток: 10Т1/2, индуцированных и нормальных миобластов. В этом
классе содержатся все обычно присутствующие в клетках гены "домашнего
хозяйства". Это и есть тот класс клонов, который должен быть удален в
результате субтрактивной гибридизации. Поскольку зонды 2 и 3
гибридизуются лишь с 1% клонов кДНК, выявляемых зондом 1, РНК,
соответствующие генам домашнего хозяйства, должны составлять большую
часть всех видов мРНК, присутствующих в клетках.
Клоны класса В содержат молекулы кДНК, соответствующие тем
молекулам РНК, которые были индуцированы обработкой 5-аза-С, но
отсутствуют в нормальных миобластах и в клетках ЮТ 1/2. Поскольку 5-аза-С
приводит к деметилированию, то неудивительно, что это вещество активирует
некоторые гены, которые в норме в миобластах не экспрессируются.
Клоны класса С содержат кДНК, соответствующую той РНК, которая
присутствует в нормальных миобластах, но отсутствует в миобластах,
обработанных 5-аза-С. Если бы индуцированные миобласты были идентичны
нормальным миобластам, такого класса клонов просто не существовало бы.
Можно было бы подозревать в индуцированных миобластах какой-то изъян,
однако, по-видимому, все дело в популяции нормальных миобластов.
Последняя содержит небольшую фракцию полностью дифференцированных
миотрубочек, которые отсутствуют в популяции индуцированных миобластов.
Таким образом, РНК, выделенная из популяции нормальных миобластов,
включает и РНК клеток более дифференцированных типов. При анализе было
обнаружено, что клоны класса С кодируют продукты генов, специфичные для
мышц, такие, как тропонин I, а также тяжелая и легкая цепи миозина.
В клонах класса D содержится кДНК, соответствующая РНК,
специфичной для миобластов. Именно в этих клонах вы надеетесь обнаружить
ген-регулятор, контролирующий дифференцировку миобластов.
Реально ген, контролирующий, по-видимому, дифференцировку
миобластов (myoDl), был обнаружен как раз в клонах этого класса. Он был
идентифицирован с помощью тестов, основанных на следующих предположениях:
1) ген-регулятор не должен экспрессироваться вообще в клетках ЮТ 1/2; 2)
его экспрессия должна достигать максимума в миобластах; 3) его экспрессия
должна снижаться в миотрубочках и 4) он не должен экспрессироваться в
таких клетках ЮТ 1/2, которые не дифференцируются после обработки 5-аза-
С. На последней стадии этих экспериментов клонированная кДНК была введена
в клетки 10Т1/2 и заставила эти клетки дифференцироваться в миобласты.
Убедительное доказательство!
Литература: Davis, R.L.; Weintraub, Н.; Lassar, А. В. Expression of
a single transfected cDNA converts fibroblasts to myoblasts. Cell 51,
987-1000, 1987.
Контроль инициации транскрипции
10-6
А. промотор
Б. репрессор лактозного оперона
В. репрессор; негативный контроль
Г. позитивный; активатор гена
Д. активатор катаболизма
Е. сигма-фактор
Ж. ТАТА-фактор (фактор транскрипции IID, TFIID); транскрипционный
комплекс
3. элемент, расположенный перед промотором
И. энхансер
10-7
A. Неправильно. Аллолактоза связывается с репрессором лактозного
оперона. Когда концентрация аллолактозы становится достаточно высокой,
она связывается с репрессором и вызывает такие алло-стерические изменения
конформации, которые приводят к ослаблению связи репрессора с ДНК, тем
самым обеспечивая возможность транскрипции.
Б. Правильно.
B. Правильно.
Г. Неправильно. Действие на расстоянии у прокариот встречается реже,
чем у эукариот, но не является необычным. Например, фосфорилированная
форма белка ntr С может стимулировать транскрипцию, даже если сайты
связывания этого белка удалены от промотора на расстояние более 1000 п.н.
Д. Неправильно. Сигма-факторы взаимодействуют со специфической
последовательностью ДНК, но лишь тогда, когда они входят в состав РНК-
полимеразы. Аналогичным образом белки-активаторы взаимодействуют с РНК-
полимеразой, но лишь в том случае, когда они связаны со своими
специфическими сайтами узнавания в ДНК.
Е. Правильно.
Ж. Правильно.
3. Неправильно. Лишь немногие энхансеры активны почти во всех типах
клеток. Большинство из них хорошо работает лишь в некоторых типах клеток.
И. Правильно.
К. Неправильно. Кроме связывания с низкомолекулярными веществами у
эукариот есть и другие механизмы активации регуляторных белков, включая
синтез белка, фосфорилирование и эффект регуляторных субъединиц.
