Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
фолликулярных клеток препятствуют блокаде повторной репликации. Поскольку
механизм блокады неизвестен, трудно строить предположения о том, из-за
чего он мог бы не сработать. Однако представляется вероятным, что белки
фолликулярных клеток, специфичные для определенных стадий развития,
связываются с точкой начала репликации или вблизи нее, в результате чего
этот сайт сохраняет свою активность. Может также оказаться, что сама по
себе эта точка начала репликации нечувствительна к блокаде повторной
репликации, но активна лишь в фолликулярных клетках, находящихся на
определенной стадии развития (подобно встроенной в хромосому точке начала
репликации SV40, которая "молчит" в отсутствие Т-антигена; см. задачу 9-
20). С другой стороны, эта точка начала репликации может быть активна во
всех тканях, но становиться нечувствительной к блокаде повторной
репликации, взаимодействуя со специфическим белком, присутствующим в
фолликулярных клетках.
398 Глава 9
II
Зн Зн
"Легкие"
молекулы
I Первый цикл I репликации
/Ч
Молекулы, промежуточные по плотности
Молекулы, "Тяжелые"
промежуточные молекулы по плотности 7
Рис. 9-42. Схема мечения цепей ДНК (ответ 9-22).
Литература: Orr- Weaver, Т. L.; Spradling, А. С. Drosophila chorion
gene amplification requires an upstream region regulating sl8
transcription. Mol. Cell. Biol. 6, 4624-4633, 1986.
9-22
A. Три пика в градиенте плотности представляют собой (в направлении от
"легкого" пика к "тяжелому") нереплицированную ДНК, ДНК, реплицированную
один раз, и ДНК, реплицированную дважды (рис. 9-42). Инъецированная ДНК
помечена 3Н, но во всех остальных отношениях это нормальная "легкая" ДНК.
Каждая новосинтезированная цепь включает метку 32Р и БУДР, который
увеличивает ее плотность. Следовательно, после одного цикла репликации
ДНК будет обладать промежуточной плотностью и содержать одну "легкую"
цепь, меченную 3Н, и одну "тяжелую", меченную 32Р. После второго цикла
репликации из гибридной ДНК образуются один дуплекс, гибридный по
плотности, и один дуплекс, содержащий две "тяжелые" цепи, меченные 32Р.
"Полностью тяжелый" дуплекс расположен в самой плотной области градиента.
Поскольку "полностью легкая" ДНК не реплицировалась, в ней не будет
содержаться 32Р, а так как "полностью тяжелая" ДНК содержит две новые
цепи, в ней не будет присутствовать 3Н. Образование дискретных пиков в
этом эксперименте имеет принципиальное значение, так как показывает, что
мечение связано главным образом с репликацией, а не с репаративным
синтезом. Если бы включение метки было связано с репаративным синтезом,
который осуществляется мозаично, то метка распределилась бы по всему
градиенту, а не собралась в дискретных пиках.
Б. Инъецируемая ДНК имитирует ожидаемое поведение хромосомной ДНК в
одном важном отношении: за один клеточный цикл она проходит только один
цикл репликации. Об этом можно судить по отсутствию "полностью тяжелой"
ДНК после прохождения одного клеточного цикла. Однако в другом отношении
поведение инъецированной ДНК значительно отличается от поведения
клеточной ДНК: большая фракция инъецированной ДНК не реплицируется даже
после двух клеточных циклов. Отсутствие репликации проявляется в
сохранении "полностью легкого" пика ДНК. Неясно, почему часть
инъецированной ДНК не реплицируется. Возможно, некоторые клетки при
использовании данной методики становятся некомпетентными.
B. Поскольку циклогексимид подавляет белковый синтез, он не должен
прямо действовать на синтез ДНК. И действительно, в присутствии
циклогексимида один цикл репликации завершается нормально, но после этого
репликация прекращается. Вероятно, циклогексимид подавляет следующий
клеточный цикл потому, что ключевые события в этом процессе зависят от
синтеза белка. Важно, что ДНК не реплицируется повторно, пока клетка не
пройдет весь цикл.
Литература: Harland, R.M.; Laskey, R.A. Regulated replication of
DNA microinjected into eggs of Xenopus laevis. Cell 21, 761-771, 1980.
Синтез и процессинг РНК
9-23
A. РНК-полимераза
Б. фактор инициации
B. факторы элонгации
Г. РНК-полимераза II; РНК-полимераза I; РНК-полимераза III
Клеточное ядро 399
Д. факторы транскрипции Е. ТАТА-фактор; ТАТА-бокс Ж.
транскрипционная единица 3. гетерогенная ядерная РНК (гяРНК)
И. матричная РНК (мРНК)
К. 5'-кэп
JI. ро1у(А)-"хвост"
М. первичный транскрипт РНК Н. сплайсинг РНК
О. гяРНП (гетерогенный ядерный рибонуклеопротеин)
П. мяРНП (малые ядерные рибонуклеопротеины)
Р. 5'-сайт сплайсинга, З'-сайт сплайсинга
С. сплайсосома Т. синдром талассемии У. ядрышко
Ф. ядрышковый организатор
9-24
A. Неправильно. Факторы инициации и элонгации не присутствуют постоянно
в составе фермента. Они временно соединяются с ферментом на стадии
инициации или элонгации синтеза РНК.
Б. Неправильно. РНК-полимеразы I, II и III структурно похожи друг на
