Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Уилсон Дж. -> "Молекулярная биология клетки " -> 241

Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.

Уилсон Дж., Хаит Т. Молекулярная биология клетки — М.: Мир, 1994. — 520 c.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка): molekulyarnayabiologiyakletki1994.djvu
Предыдущая << 1 .. 235 236 237 238 239 240 < 241 > 242 243 244 245 246 247 .. 308 >> Следующая

Quant. Biol. 42, 523-529, 1977.
9-30
А. Были помечены 5'-концы молекул РНК. На радиоавтограмме проявляются
лишь меченые фрагменты (рис. 9-25). Следовательно, если самые короткие
фрагменты (те, которые доходят до конца геля) относятся к 5'-концу, то
5'-конец должен нести метку.
Б. Полосы, соответствующие адениловым нуклеотидам в сигнальной
последовательности AAUAAA, отсутствуют в случаях полиадени-лированной и
расщепленной РНК (рис. 9-25, дорожки 3 и 4) потому,
Клеточное ядро 403
что модификация любого из этих А препятствует расщеплению и
полиаденилированию. Таким образом, молекулы РНК, несущие единственную
модификацию в сигнальной последовательности, не узнаются компонентами
экстракта и в результате не выявляются ни в популяции полиаденилированных
молекул (дорожка 3), ни в популяции молекул, подвергшихся расщеплению
(дорожка 4).
В. Полоса А, указанная на рис. 9-25 стрелкой, отсутствует в случае
полиаденилированной РНК, однако выявляется в расщепленной РНК, поскольку
модификация этого А не препятствует расщеплению, но мешает
полиаденилированию. Именно поэтому молекулы РНК с модификацией этого А в
популяции расщепленных молекул содержатся, а в популяции
полиаденилированных молекул-нет (дорожка 3).
Г. Проведенный в пунктах Б и В анализ отсутствующих полос показывает,
что для расщепления молекул РНК-предшественника важна сигнальная
последовательность AAUAAA, а для полиаденилирования необходимы эта
последовательность и еще один А.
Д. Если пометить другой, а именно З'-конец молекулы РНК, то можно
определить, принимают ли участие в полиаденилировании какие-либо из А и С
на З'-конце участка расщепления. Такие эксперименты были проведены, и
оказалось, что ни одна модификация на З'-конце участка полиаденилирования
не препятствует полиаденилированию.
Литература: Conway, L.; Wickens, М. Analysis of mRNA З'-end
formation by modification interference: the only modifications which
prevent processing lie in AAUAAA and the poly(A) site. EMBO J. 6, 177-
4184, 1987.
9-31
А. Ваша идея состояла в том, чтобы добиться расщепления РНК, входящей в
состав мяРНП. Эта РНК, как вы полагаете, взаимодействует с консервативной
последовательностью на З'-конце предшественника гистоновой мРНК. Если
взаимодействие мяРНП с РНК-предшественником сводится к гибридизации, то
олигонуклеотид, комплементарный последовательности в составе РНК-
предшественника, должен гибридизоваться с мяРНК. Образование гибрида ДНК-
РНК сделает мяРНК чувствительной к расщеплению РНКазой Н. Расщепление же
мяРНК в этом важном участке взаимодействия должно привести к потере
экстрактом способности осуществлять процессинг предшественника. Этот
результат вы и получили для обобщенного олигонуклеотида и олигонуклеотида
мыши.
Б. Неспособность олигонуклеотида человека блокировать процессинг-это
неожиданный результат опыта, в котором использовали экстракт из клеток
человека. Однако изучение гибридов, которые могут образовываться между
различными олигонуклеотидами и 117-мяРНК, показывает, что обобщенный
олигонуклеотид и олигонуклеотид мыши образуют совершенные гибриды длиной
9 и 10 нуклеотидов соответственно (рис. 9-43). Напротив, продукт гибри-
3' GTGTCGATGAAACCA 5'Человек I I I I I I ////
5' nuG-NNGUGUUACAGCUCUUUUAGAAUUUGUCUAGU 3' 117-мяРНК человека I II I I I
I I I I 3' TTGTCGAGAAAGGC 5' Мышь
I I I I I I I I I
31 TGGTCGAGAAAGAAA 5' Обобщенная последовательность
Рис. 9-43. Спаривание между тремя олигонуклеотидами и Ш-мяРНК человека
(ответ 9-31).
26*
404 Глава 9
Рис. 9-44. Сумма отличий от последовательности гена (3-глобина коровы
(ответ 9-32). Последовательность гена Р-глобина коровы сравнивали по
каждому нуклеотиду с последовательностями генов Р-глобина шести других
видов. Суммарное число различий по данной позиции приведено под каждым
нуклеотидом последовательности для р-глобина. Общие суммы различий с
каждой стороны границы экзон/интрон (пунктирная линия) приведены внизу.
GGTGGTGAGGCCCTGGGCAG
00312100211100012000
15
Экзон
Рис. 9-45. Сплайсинг лидерной РНК и актиновой РНК с образованием
актиновой мРНК (ответ 9-33). Подчеркнуты GU в 5'-сайте сплайсинга
лидерной РНК и AG в З'-сайте сплайсинга актиновой РНК. Подчеркнуты также
лидерные фрагменты, идентифицированные путем сравнения
последовательностей, и сайты начала трансляции.
GTAGGTATCCCACTTACAAG
003110233455 63332333 53
Интрон
дизации с олигонуклеотидом человека содержит один неспарив-шийся
нуклеотид, который делит молекулу на два фрагмента размером 6 и 4
нуклеотида (рис. 9-43). Стабильность спаривания двух отдельных фрагментов
не так велика, как у молекулы, все основания которой спарены.
Следовательно, олигонуклеотид человека не будет спариваться с той
Предыдущая << 1 .. 235 236 237 238 239 240 < 241 > 242 243 244 245 246 247 .. 308 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed