Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
друга, и некоторые субъединицы у них общие, но другие уникальны.
B. Правильно.
Г. Правильно.
Д. Неправильно. З'-конец большинства транскриптов, синтезируемых РНК-
полимеразой II, определяется не точкой терминации транскрипции, а сайтом
расщепления цепи РНК, который находится через 10-30 нуклеотидов после
последовательности AAUAAA.
Е. Правильно.
Ж. Правильно.
3. Неправильно. Как частицы гяРНП, так и частицы мяРНП состоят из
многих полипептидных цепей, образующих комплекс с РНК. Однако частицы
гяРНП содержат мРНК, которая весьма нестабильна.
И. Неправильно. Несмотря на то что интронные последовательности в
основном удаляются, они должны быть вырезаны очень точно, поскольку
ошибка даже на один нуклеотид приведет к сдвигу рамки считывания в
образовавшейся молекуле РНК и сделает бессмысленной всю матрицу.
К. Правильно.
Л. Правильно.
М. Неправильно. 28S-pPHK, 18S-pPHK и 5,8S-pPHK транскрибируются как
части одного большого предшественника-45S-PHK, который затем разрезается
с образованием одной копии каждой из трех рРНК. Образование этих трех
рРНК из одного первичного транскрипта гарантирует, что они будут
синтезированы в одинаковых количествах.
Н. Неправильно. Рибосомные РНК упаковываются вместе с рибо-сомными
белками в ядрышке.
О. Правильно.
П. Правильно.
Р. Неправильно. Интерфазные хромосомы стремятся занять в интерфазном
ядре определенные области, и маловероятно, что они сильно переплетены с
другими хромосомами.
400 Глава 9
9-25
A. На дорожке 4 отсутствует транскрипт размером 400 нуклеотидов (рис.
9-20), так как в реакционной смеси присутствовал GTP. GTP обеспечивает
возможность того, чтобы транскрипция продолжалась дальше
последовательности, не содержащей С, в результате чего образуются
транскрипты размером более 400 нуклеотидов. В отсутствие GTP (дорожка 2)
транскрипция не может продолжаться за пределами не содержащей С
последовательности (С-минус). В присутствии GTR и РНКазы Т1 (дорожки 6 и
8) более длинные транскрипты расщепляются у первого G с образованием
транскрипта размером 400 нуклеотидов.
Б. Одна из трудностей, возникающих при изучении функционирования
промотора in vitro, связана с высокой фоновой неспецифической инициацией
транскрипции. Именно этот фон так сильно проявляется на дорожке 3.
Причины его возникновения до конца не ясны, однако транскрипция может
начинаться и с последовательностей в остальной части плазмиды, имеющих
некоторое сходство с настоящими промоторами РНК-полимеразы II.
B. Транскрипт размером 400 нуклеотидов присутствует на дорожке 5,
потому что в результате расщепления РНКазой Т1 он высвобождается из любых
случайно инициированных транскриптов, считывание которых проходило через
последовательность С-минус. Фактически он на несколько нуклеотидов
длиннее, чем специфически инициированный транскрипт, так как его 5'-конец
определяется первым G, который предшествует последовательности С-минус.
Транскрипт размером 400 нуклеотидов отсутствует на дорожке 7,
поскольку З'-О-метил-GTP приводит к терминации большинства транскриптов,
инициируемых перед последовательностью С-минус. Комбинация З'-О-метил-GTP
и РНКазы Т1 фактически приводит к исчезновению всего фонового синтеза с
контрольной плазмиды.
Г. Определение специфической транскрипции в грубых экстрактах (то есть
в присутствии GTP) не должно представлять особых трудностей. Как показано
на рис. 9-20 (дорожки 7 и 8), специфическую транскрипцию можно определить
в присутствии G-нуклеотидов, если в реакционную смесь добавлены З'-О-
метил-GTP и РНКаза Т1 (для подавления фоновой транскрипции и расщепления
всех случайных транскриптов на мелкие фрагменты).
Литература: Sawadogo, М.; Roeder, R.G. Factors involved in specific
transcription by human RNA polymerase II: analysis by a rapid and
quantitative in vitro assay. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82, 4394-4398,
1985.
9-26
А. Эффективность транскрипции, рассчитанная для области плато,
составляет 7,2 х 109 транскриптов на одну реакцию. Действительно, в ходе
реакции включается 2,4 пмоль СМР, и длина каждого транскрипта составляет
400 нуклеотидов, из которых 200 нуклеотидов приходится на СМР.
Транскрипты 2,4 пмоль СМР 6 х 1023 СМР
-------------- ---------------- X X
Реакция Реакция моль
моль
X ----------- X
1012 пмоль
Транскрипт ч
х----------- = 7,2 х 10 транскрипт/реакция.
Клеточное ядро 401
Б. В одной реакции участвует 1,0 1011 матриц. При концентрации
16 мкг/мл в 25 мкл реакционной смеси содержится 0,4 мкг матрицы (16
х 0,025 = 0,4). Каждая матрица содержит 3500 пар нуклеотидов (п.н.).
Матрицы 0,4 мкг 6 х 1017 Да п.н. Матрица
_________=__________х_____________х_________X___________-
Реакция Реакция мкг 660 Да 3500 п. н.
= 1,0-1011 матрица/реакция.
