Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
центрифугирования.
___Д. В фазе Gj клетки претерпевают переходное состояние, называемое
точкой старта; оно связано с внутренними изменениями, приводящими к
началу синтеза ДНК.
___Е. Скорости синтеза большинства белков изменяются в зависимости
от стадии клеточного цикла.
___Ж. Если клетка в фазе S сливается с клеткой в ранней фазе Gt, то
в ядре, находящемся в фазе Gx, немедленно начинается синтез ДНК.
___3. При слиянии клеток в фазе G2 с клетками в фазе S в ядрах
S-фазных клеток блокируется синтез ДНК. Это явление известно как
блокада повторной репликации ДНК.
___И. При слиянии митотических клеток с клетками в любой другой фазе
клеточного цикла все ядра в общей цитоплазме вступают в митоз.
___К. В нормальных клетках каждая стадия клеточного цикла зависит от
правильного завершения предшествующей стадии.
___JI. Ни синтез РНК, ни синтез белка не являются необходимыми для
вступления клеток в митоз.
___М. Созревание ооцитов Xenopus можно вызвать по крайней мере
тремя способами: воздействием прогестерона, микроинъекцией белка
MPF или микроинъекцией мРНК циклина.
13-3 Определение доли клеток, находящихся в митозе, (митотического
индекса)-это общепринятый метод для оценки продолжительности клеточного
цикла. Вы решили измерить клеточный цикл в печени взрослой мыши путем
определения митотического индекса. С этой целью вы приготовили срезы
печени и окрасили их для выявления митотических клеток. Через три дня при
подсчете вы обнаружили только 3 митоза на 25 ООО клеток. Предполагая, что
фаза М длится 1 ч, рассчитайте продолжительность цикла в печени взрослой
мыши.
13-4 Общую продолжительность клеточного цикла и доли в ней фаз Gx, S, G2
и М можно определить с использованием метода микроскопии и метода
радиоавтографии. Рассмотрите, например, следующую серию экспериментов,
поставленных для изучения клеточного цикла у L-клеток мыши.
Рост и деление клеток 239
Время, ч
Рве. 13-1. Увеличение числа L-кле-ток мыши во времени (задача 13-4).
А. МЕЧЕНЫЕ МИТОЗЫ
О
^Н-тимидина, ч
Б. ЧИСЛО ЗЕРЕН СЕРЕБРА
Время после добавления
о
Н-тимидина, ч
Рве. 13-2. Число меченых мито-пиеских клеток как функция времени,
прошедшего после добавления 3Н-тимидина (задача 13-4).
А. Фракция меченых митотических меток. Б. Среднее число зерен ;бра над
мечеными митотичес-гами клетками.
А. Общую продолжительность клеточного цикла измеряли по скорости роста
популяции в экспоненциальной стадии. Для этого подсчитывали число клеток
в пробах культуральной жидкости, отобранных в разные моменты времени
(рис. 13-1). Какова общая продолжительность клеточного цикла у L-клеток
мыши?
Б. За исключением митоза, хорошо видимого в световом микроскопе и
продолжающегося около 1 ч, определение длительности фаз клеточного цикла
требует тщательного экспериментального анализа. В одном из таких
экспериментов к асинхронно растущей клеточной популяции (со случайным
распределением по клеточному циклу) добавляли 3Н-тимидин, затем через
определенные промежутки времени клетки окрашивали и готовили для
радиоавтографии. Клетки, включившие 3Н-тимидин, засвечивали фотоэмульсию,
и над ними появлялись зерна серебра. На рис. 13-2, А изображена
зависимость относительного количества меченых митотических клеток от
времени, прошедшего после добавления 3Н-ти-мидина. На рис. 13-2, Б
представлен график зависимости среднего числа зерен серебра над
митотическими клетками от времени после добавления 3Н-тимидина. На основе
этих данных и другой информации, содержащейся в задаче, определите
продолжительность фаз Gj, S и G2 клеточного цикла L-клеток мыши и
объясните ход своих рассуждений.
13-5 Для многих экспериментов желательно иметь популяцию клеток,
проходящих клеточный цикл синхронно. Один из методов синхронизации,
разработанный в числе первых и часто используемый до сих пор, - это так
называемый метод двойной тимидиновой блокады. Если добавить к
культуральной жидкости тимидин в высокой концентрации, то синтез ДНК в
клетках прекращается. Избыток тимидина блокирует фермент
рибонуклеотидредуктазу, преобразующий рибонуклеотиды в
дезоксирибонуклеотиды. При ингибировании этого фермента количество
дезоксирибонуклеотидов падает и синтез ДНК останавливается. Когда избыток
тимидина удаляют, заменяя среду на новую, количество
дезоксирибонуклеотидов увеличивается и синтез ДНК начинает идти
нормально.
Для клеточной линии с 22-часовой продолжительностью клеточного
цикла, где М = 1 ч, Gt = 10 ч, S = 7 ч и G2 = 4 ч, схема эксперимента по
синхронизации методом двойной тимидиновой блокады должна быть следующей:
1. В 0 ч (t = 0 ч) добавить избыток тимидина.
2. Через 18 ч (t = 18 ч) избыток тимидина удалить.
3. Через 10 ч (t = 28 ч) добавить избыток тимидина.
4. Через 16 ч (t = 44 ч) избыток тимидина удалить.
А. В какой точке клеточного цикла находится популяция клеток,
