Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
маленьких везикул, содержащш строительный материал для образования
фертилизационш мембраны. Поскольку эту мембрану можно легко увидет! в
световой микроскоп, ее формирование служит простым тестом на активацию
яйца, дающим ответ типа "все или ничего", ; Яйцо можно активировать и без
сперматозоида, если проинкубировать его в среде с кальциевым ионофором,
содержаще! также и ионы Са2 + .
Узнав, что инозитолфосфаты освобождают Са2+ из внутри
клеточных запасов, вы тут же проверили их действие на яйщ морского ежа.
Действительно, когда вы инъецировали в яйщ ¦ 10"17 моль (l,4,5)InsP3,
образовалась фертилизационная мембрана. Однако активация зависела от
наличия Са2 + во внешне! среде: добавление в среду ЭГТА-соединения,
хелатирующеи Са2 + - препятствовало активации. Зависимость активации m
наружного кальция была для вас неожиданной, потому чти ¦
(1.4.5)InsP3 не открывает кальциевые каналы в плазматической
мембране. Другие инозитолтрисфосфаты-(2,4,5)1шР31
(1.3.4)InsP3,-мобилизующие внутриклеточный Са2+ в друга
клетках, при инъекции в яйца морского ежа активацию и вызывали.
Неэффективен оказался в этом отношении i
(1.3.4.5)1шР4-инозитолтетракйсфосфат. Однако при совместно!
инъекции "неактивных" инозитолфосфатов - (2,4,5)InsP3 i
(1.3.4.5)InsP4 - наблюдалась полная
активация. Смесь (2,4,5)InsP, с (l,3,4)InsP3 была неактивной, равно как и
комбинация в
(2.4.5)InsP3 со смесью изомеров lnsP4 случайного состава, в
содержащей (l,3,4,5)InsP4.
Эти результаты (табл. 12-3) поставили вас в тупик. Ви
показываете их некоторым своим коллегам и спрашиваете у нш совета. Один
из них рассказывает вам, что слышал на семинар!
о выделении инозитолкиназы, специфично фосфорилирующа инозитол и
его производные по третьему положению. Эти обрывок информации все
проясняет, теперь вы в состояни сами разрешить вопросы, которые задавали
коллегам.
А. Почему одновременное введение (2,4,5)InsP3 и (1,3,4,5)1п$Р,
активирует яйца, но по отдельности эти вещества неэффектш-ны?
Б. Почему (l,4,5)InsP3 способен "в одиночку" активировать яйца!
Почему этого не может сделать смесь из (2,4,5)InsP3 н
(1.3.4)InsP3?
12-25 Весьма наглядная иллюстрация одной хотя и второстепенной, но все же
важной функции сАМР на уровне организма была
Верх Дно
Рис. 12-11. Распределение активности фосфодиэстеразы сАМР при
центрифугировании гомогенатов из нормальных мух и из dunce-мутантов в
градиенте плотности сахарозы (задача 12-25).
Межклеточная сигнализация 231
Таблица 12-3. Активация яиц морского ежа (задача 12-24)
Инъецированные ннозитиды Добавки к среде Активация яиц
1. (l,4,5)InsP3 Без добавок Нет
2. (l,4,5)InsP3 Са2 + Да
3. (l,4,5)InsP3 Са2+ и ЭГТА Нет
4. (2,4,5)InsP3 Са2 +
5. (l,3,4)InsP3 -"-
6. (l,3,4,5)InsP4 ---"-
7. (2,4,5)InsP3 и Да
(l,3,4,5)InsP4
8. (2,4,5)InsP3 и -"- Нет
(l,3,4)InsP3
9. (2,4,5)InsP3 и ---"-
(w,x,y,z)InsP4 *
* (w,x,y,z)InsP4-смесь изомеров InsP4 случайного состава.
получена в исследованиях, проводившихся на плодовой мушке
Drosophila melanogaster. В одной из лабораторий в поисках гена
фосфодиэстеразы сАМР проводили измерения содержания этого фермента у мух
с хромосомными дупликациями или делениями и обнаружили заметные
отклонения в тех случаях, когда мутации затрагивали сегменты 3D3 и 3D4 на
Х-хромосоме. Дупликации в этой области приводили к 1,5-кратному
увеличению активности, делеции - к уменьшению активности вдвое. При
делециях наблюдалось частичная стерильность самок.
В другой лаборатории того же института при изучении
поведенческих мутантов дрозофилы обратили внимание на тот же участок Х-
хромосомы. Исследователи разработали тест на обучение, в котором мухам
предлагали две металлические сетки, одна из которых находилась под током.
Если сетка под током была намазана пахучим веществом, нормальные мухи
быстро обучались избегать ее и продолжали это делать, даже когда ток
отключали. В отличие от них мутантные мухи не научились избегать пахнущей
сетки; они были названы dun-се-мутантами. Мутация dunce (тупица) была
генетически картирована и отнесена к сегментам 3D3 и 3D4. У мух,
отобранных по этому признаку, наблюдалась также частичная стерильность
