Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
температуре, но растут при____________температуре.
Г. Мутации_____________у дрожжей вызывают блокирование либо
нарушение той или иной части клеточного цикла.
Д. В клеточном цикле дрожжей существует критическая точка,
называемая______________, прохождение которой означает, что цикл кле-
точного деления будет обязательно завершен.
13-9 Укажите, какие из следующих утверждений правильные, а какие-нет.
Если утверждение неверно, объясните почему.
___А. Дрожжи важны для исследований клеточного цикла в первую
очередь потому, что их можно выращивать в больших количествах,
необходимых при биохимическом анализе.
___Б. Наиболее существенные регуляторы клеточного цикла у дрожжей-это
тип питания и пол.
___В. У дрожжей ингибирование синтеза ДНК вызывает и прекращение
цитокинеза; однако мутанты, не способные осуществлять цитокинез,
могут многократно повторять цикл синтеза ДНК.
___Г. У клеток данного типа объем примерно пропорционален содержанию
ДНК.
___Д. Гомологичные белки, кодируемые у S. cerevisiae геном CDC2H и у S.
pombe геном CDC2+, являются протеинкиназами.
242 Глава 13
__Е. Когда после голодания клетки дрожжей помещают в богатуи
питательную среду, они быстро проходят точку старта и возоб
новляют клеточный цикл.
13-10 Мутации, блокирующие ту или иную фазу клеточного цикла очень важны
для выявления механизмов его регуляции и кош роля. У дрожжей выявлено
большое количество таких мутацш ! Обычно для характеристик мутантов по
клеточному циклу (ак определяют сначала фазу, на которой блокирован цикл.
Темп" ратурочувствительные "fc-мутанты особенно ценны, потому чя они
нормально растут при одной (пермиссивной) температуре, а проявляют
мутантный фенотип при более высокой (рестриктш ной) температуре. В одном
из методов, применяемых для изуче ния температурочувствительных с^с-
мутаций, используется гид роксимочевина-токсичное соединение, блокирующее
сини ДНК за счет ингибирования рибонуклеотидредуктазы (постав ляющей
предшественники дезоксирибонуклеотидов). Блокад; синтеза ДНК
гидроксимочевиной можно снять, просто замени ¦ среду инкубации.
Рассмотрим опыты с гипотетическими cdc-щ тантами 101 и 102.
Вы инкубируете культуру мутанта cfifclOl дрожжей при рот
риктивной температуре (37°С) в течение 2 ч (приблизительна
продолжительность клеточного цикла у дрожжей) с тем, чтоб! проявился
мутантный фенотип. Затем вы переносите клеи в среду, содержащую
гидроксимочевину, и инкубируете их пр пермиссивной температуре (20°С).
Клетки не делятся.
Изменив порядок обработки, вы инкубируете культуру щ танта
cfifclOl при 20°С в течение 2 ч в среде, содержащей гидро! симочевину, а
затем переносите клетки в среду без гидроксим" чевины и инкубируете при
37°С. Клетки проходят один цш деления.
Вы повторяете эти два опыта с мутантом cdc 102. Клетки" делятся
ни в одном случае.
А. В какой фазе клеточного цикла блокирован мутант cdc\Q\ пр
рестриктивной температуре? Объясните результаты опытов обратной сменой
температуры.
Б. В какой фазе клеточного цикла блокирован мутант cdc\02 щ ¦
рестриктивной температуре? Объясните результаты опытов! обратной сменой
температуры.
13-11 Вы выделили температурочувствительный мутантный штам ; почкующихся
дрожжей. Он хорошо растет при 25°С, но при 35'( все клетки образуют по
крупной почке, а затем прекращают рос ? К моменту прекращения роста
клетки приобретают характеру морфологию (landmark morphology).
Синхронизировать рост клеток такого мутанта очень труда но вам
хотелось бы как можно точнее установить, в какой тон клеточного цикла
температурочувствительный продукт гена дол жен действовать, чтобы клетка
завершила цикл. Критическа точка, где действует данный продукт,-это
"точка удара" да мутанта. Один толковый приятель, у которого есть хорош
микроскоп с нагревательным столиком и видеокамера для цей раферной
съемки, предлагает вам заснять клетки в поле зреш при повышении
температуры и проследить таким способом! поведением отдельных клеток при
остановке их роста. Посколы] это неподвижный организм, то относительно
легко наблюдаты изменениями в индивидуальных клетках. Чтобы разобратьс
Рост и деление клеток 243
Рис. 13-4. Цейтраферная съемка клеток температурочувствительного мутанта
дрожжей (задача 13-11). Клетки во внутреннем круге расположены в порядке
изменения размеров их почек, т. е. по фазам клеточного цикла. После
инкубации при 35 °С в течение 6 ч они превращаются в клетки,
расположенные по внешнему кругу. Дальнейшего роста и деления не
происходит.
Оо
Оо
в результатах наблюдений, вы располагаете фотографии клеток,
относящиеся к началу опыта, по кругу в порядке увеличения размеров
дочерних почек. Затем вы находите фотографии тех же клеток, сделанные
через 6 ч, когда рост полностью прекратился. Результаты вашего опыта
представлены на рис. 13-4.
А. Укажите на рис. 13-4, где находится точка удара для мутанта.
