Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
плазматической мембраны посредством связанной с его N-концом миристиновой
кислоты (жирная кислота С: 14). Вы выделили мутант RSV, у которого p60src
не связывается с миристиновой кислотой из-за изменения на N-конце. Чтобы
определить значение этого связывания для трансформации, вы инфицируете
клетки мутантным вирусом и вирусом дикого типа и сравниваете свойства
инфицированных и неинфицированных клеток. Как видно из данных табл. 13-4,
клетки, инфицированные мутантным вирусом, не проявляют почти ни одного
классического симптома трансформации.
Анализ клеток, инфицированных мутантным вирусом, показывает, что они
содержат много белка p60src, однако он находится в цитоплазме, а не
связан с мембраной. Тем не менее в клетках, инфицированных мутантным
вирусом, и в клетках,
Рост и деление клеток 249
Таблица 13-4. Связанные с трансформацией свойства неинфицированных клеток
и клеток, инфицированных RSV дикого типа или мутантным RSV (задача 13-20)
Признаки трансформации Неинфициро- Клетки, инфи- Клетки, инфи-
ванные клетки цированные
цированные
RSV дикого
мутантным
типа
RSV
Рост на мягком агаре --- + + + ---
Фибронектин + + + - + + +
Активатор плазминогена --- + + + ---
Адгезионные пластинки + + + --- + + +
Повышение концентрации
глюкозы + + + + +
Плотность насыщения, число 2 • 106 МО7 3-106
клеток на чашку
зараженных вирусом дикого типа, наблюдается одинаково высокая
тирозинкиназная активность, превышающая активность в неинфицированных
клетках в 100 раз.
Вы удивлены и обескуражены таким результатом. Как может
трансформация вызываться тирозинкиназной активностью, если она одинакова
в случаях мутантного вируса и вируса дикого типа, а они при этом
различаются по способности трансформировать клетки? Одно из объяснений
может состоять в том, что ключевая мишень для фосфорилирования остается
нефосфори-лированной в случае мутанта по p60src. Исходя из этого, вы
анализируете известные мишени фосфорилирования для р60'тс в
инфицированных клетках. Как видно из результатов, суммированных в табл.
13-5, различия между клетками, инфицированными мутантным вирусом, и
клетками, содержащими вирус дикого типа, относительно малы. Даже
несколько более низкие уровни фосфорилирования р36, р81 и
лактатдегидрогеназы в клетках, инфицированных мутантным вирусом, по-
видимому, не имеют значения, поскольку другие линии RSV, легко
трансформирующие клетки, фосфорилируют эти отдельные белки в еще меньшей
степени.
Таблица 13-5. Фосфорилирование белков в неинфицированных клетках и
клетках, инфицированных RSV дикого типа или мутантным RSV (задача 13-20)
Фосфорилированный белок Неинфици- Клетки, инфи Клетки, инфи
рованные цированные цированные
клетки RSV дикого типа мутантным RSV
Винкулин 4 100 800
р36 < 1 100 35
р81 < 1 100 30
Енолаза < 1 100 100
Лактатдегидрогеназа < 1 100 55
р50 < 1 100 100
А. Исключают ли эти результаты возможность того, что p60src вызывает
трансформацию посредством своей тирозинкиназной активности? Поясните ваш
ответ.
250 Глава 13
Время, мес
Рис. 13-6. Время появления признаков односторонней и двухсторонней
ретинобластомы (задача 13-21). На графике представлены данные для
популяции детей, у которых в том или ином возрасте развивается
ретинобластома. Показана зависимость той доли популяции, в которой
ретинобластома еще не возникла, от времени после рождения.
Б. Ясно, что связывание p60src с миристиновой кислотой и после дующее
прикрепление его к мембране имеют решающее значение для трансформации.
Предложите два объяснения того, почем; связывание с мембраной существенно
для трансформации, вызы ваемой p60src.
13-21 Ретинобластома-это чрезвычайно редкая разновидность ран нервных
клеток глаза. Заболевание поражает преимущественно детей в возрасте до
пяти лет, поскольку оно может возникнув только тогда, когда нервные
клетки еще делятся. Иногда onyxoi поражает лишь один глаз, но бывает и
так, что опухоли разв§ ваются на обоих глазах. В последнем случае болезнь
всегда ноя наследуемый характер, тогда как поражение одного глаза чащ
всего встречается в семьях, где раньше этого заболевания л было.
Если построить график зависимости той части детей, у кото-рых
заболевание ещё не возникло, от возраста детей, в выявляется весьма
информативное различие между двухсторов-ним и односторонним поражениями
