Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Уилсон Дж. -> "Молекулярная биология клетки " -> 150

Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.

Уилсон Дж., Хаит Т. Молекулярная биология клетки — М.: Мир, 1994. — 520 c.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка): molekulyarnayabiologiyakletki1994.djvu
Предыдущая << 1 .. 144 145 146 147 148 149 < 150 > 151 152 153 154 155 156 .. 308 >> Следующая

poly(HEMA) так, чтобы высота клеток в каждой из разреженных культур
соответствовала высоте клеток в соответствующей плотной культуре.
Результаты ваших измерений по включению 3Н-ти-мидина в таких разреженных
культурах приведены в табл. 13-2.
Таблица 13-2. Включение 3Н-тимидина клетками, растущими в обычных чашках
и в чашках, обработанных poly(HEMA) (задача 13-14)
Тип чашки Число Плотность Высота Включение 3Н-
клеток расположения клеток, тимидина,
на чашку мкм имп/мин на
1 чашку
Необработанная 60000 Почти плотно 6 15 200
Необработанная 200000 Плотно 15 11000
Необработанная 500000 Плотно 22 3 500
Poly(HEMA) 30000 Редко 6 7 500
Poly(HEMA) 30000 Редко 15 1 500
Poly(HEMA) 30000 Редко 22 210
Какой вывод могли бы вы сделать на основе результатов,
представленных в табл. 13-2: коррелирует ли зависимое от плотности
торможение роста клеток полностью, частично или не коррелирует вовсе с
изменениями формы клеток? Обоснуйте ваше заключение.
13-15 Клетки позвоночных задерживаются в фазе клеточного цикла до тех
пор, пока условия существования не станут благоприятными для вхождения в
фазу S с последующим делением клетки. Некоторые потребности в факторах
роста для прохождения фибробластами фазы G, были определены с
использованием ЗТЗ-клеток мышй, представляющих собой фибробластоподоб-ную
линию. В отсутствие сыворотки крови эти клетки не вступают в фазу S, но
если к культуре таких "остановленных" клеток добавить сыворотку, они
проходят фазу Gj и через 12 ч вступают в фазу S. Сыворотка может быть
заменена тремя факторами роста: РФТ, ФРЭ и соматомедином С. Если три этих
фактора вместе с соответствующими питательными веществами добавить к
покоящимся клеткам, то через 12 ч они вступают в фазу S. Если хотя бы
один из этих факторов отсутствует, клетки в фазу S не вступают.
Должны ли все эти три фактора роста присутствовать
одновременно? Являются ли их эффекты независимыми, или же они стимулируют
клетки, действуя поочередно в определенной последовательности? Чтобы
ответить на эти вопросы, вы предварительно обрабатываете клетки факторами
роста в определенной последовательности, а затем добавляете полноценную
среду (содержащую сыворотку и питательные вещества) с 3Н-тимиди-ном.
Через определенные промежутки времени после этого вы
246 Глава 13
фиксируете клетки и проводите их радиоавтографию. Вреш появления
первых меченых ядер вы отмечаете как время вхождЕ' ния в фазу S.
Результаты этого опыта представлены в табл. 13-3, Необходимы ли эти
факторы роста клеткам одновременно, независимо друг от друга или в
определенной последователь' ности? Поясните ваш ответ.
Таблица 13-3. Влияние предварительной обработки ЗТЗ-клеток факторами рост
на срок вхождения в фазу S (задача 13-15)
Опыт Порядок добавления Время до
наступления
фазы S
1 2 3 4
1 ФРЭ РФТ СомС Среда 12 ч
2 ФРЭ СомС РФТ 12 ч
3 РФТ ФРЭ СомС 1 ч
4 РФТ СомС ФРЭ 6 ч
5 СомС ФРЭ РФТ -"- 12 ч
6 СомС РФТ ФРЭ - "- 6 ч
Клетки обрабатывали в течение 6 ч факторами роста, которые добавляли
в указанно" порядке. Перед добавлением следующего фактора роста клетки
тщательно отмывали я предыдущего. После обработки факторами роста
добавляли полную среду с 3Н-тимидино" и определяли время появления метки
в клеточных ядрах.
13-16 Молекулярные механизмы действия белковых факторов рост пока неясны,
однако отдельные этапы процесса поддаются эк(r) риментальному исследованию.
Например, ФРЭ стимулируя пролиферацию эпителиальных клеток многих типов
при перво! связывании с рецепторами ФРЭ на их поверхности. Роль рецеп
тора ФРЭ в распространении сигнала пролиферации тепер проясняется
благодаря изучению самого рецептора. При эта широко используют клеточную
линию А-431 мышиных фибр" бластов, содержащих необычайно большое число
рецепторо! ФРЭ, что существенно облегчает их исследование. Рассмотри
следующую серию экспериментов.
1. Препараты плазматических мембран из клеток А-431 содер жат
много белков, как показывает их анализ в ДСН-re.i (рис. 13-5, А). Однако
при добавлении к такому препарат ,251-ФРЭ в присутствии агента,
сшивающего белки, мети включают только два белка (рис. 13-5, Б, первая
дорожка) При добавлении к среде инкубации избытка немеченого ФРЗ метка в
полосе 170 к Да исчезает (рис. 13-5, Б, вторая доро* ка).
2. Если препарат мембран инкубировать с у-32Р-АТР, то некото рые
белки, в том числе и белок с мол. массой 170 кДа фосфорилируются.
Включение в состав инкубационной смеи ФРЭ приводит к существенному
ускорению этой реакции.
3. Если осадить белок 170 кДа с помощью специфичных к нем] антител
Предыдущая << 1 .. 144 145 146 147 148 149 < 150 > 151 152 153 154 155 156 .. 308 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed