Биология в 3 томах. Tом 2 - Тейлор Д.
ISBN 5-03-003686-5
Скачать (прямая ссылка):
12.9. Лабораторная работа
Цель практических занятий — освоение некоторых основных бактериологических методов. В качестве относительно безопасного источника бактерий мы рекомендуем использовать молоко. Молоко служит прекрасной пищей не только для млекопитающих, но и для многих бактерий.
12.9.1. Содержание бактерий в молоке
Даже при максимальном соблюдении правил гигиены бактерии неминуемо попадают в молоко во время доения и последующей обработки. Парное молоко обычно сразу охлаждают, чтобы замедлить развитие бактерий. Необработанное (сырое) молоко пастеризуют, т. е. прогревают, чтобы убить патогенные бактерии. При этом многие непатогенные бактерии выживают. В молоке присутствуют следующие бактерии:
1. При 15—30 °С преобладает Streptococcus lactis (грамположительный микроорганизм) и многие другие стрептококки (тоже грам положительные), а также корине-формные (булавовидные) бактерии (например, Microbacierium, Brevibacterium), которые похожи на Lactobacillus, но имеют утолщения на концах палочек.
Streptococcus !actis хорошо растет при 10 °С, но при температуре свыше 40 °С его рост прекращается,
2. При 30—40 °С доминируют различные виды Lactobacillus (грам положительные) и кишечные бактерии (грамотрицатель-ные), например Е. coli.
Streptococcus lactis и Lactobacillus относятся к молочнокислым бактериям. В процессе броже-
_Микробиология и биотехнология 57
ния (анаэробного дыхания) они образуют из лактозы (молочного сахара) молочную кислоту, которая, накапливаясь, вызывает скисание молока. Колонии S. lactis и Lactobacillus относительно малы (максимальный диаметр колонии не превышает нескольких миллиметров), не окрашены и выглядят белыми, как мел. S. lactis образует гладкие колонии с ровными краями. Если в питательный агар добавить мелко измельченный карбонат кальция, то вокруг каждой колонии образуются прозрачные зоны, где молочная кислота растворяет карбонат кальция. Стрептококки необходимы для нормального скисания молока. Они имеют сферическую форму и образуют цепочки (рис. 12.12). Клетки Lactobacillus имеют палочковидную форму, и легко слипают-
Рис. 12.12. А. Фотография Lactobacillus bulgaricus — палочковидной грамположительной бактерии, которая вызывает скисание молока, — полученная с помощью сканирующего электронного микроскопа. Б. Световая микрофотография цепочек стрептококков, выделенных из молока.
БОТАНИКА
ся, образуя длинные цепочки (рис. 12.12). Колонии имеют шероховатую поверхность и неровные края.
В молоке можно обнаружить и ряд других бактерий, в том числе живущую в кишечнике палочку Alcaligenes (грамотрицательная), клетки которой могут быть одиночными или образовывать цепочки. Их можно распознать на агаре Макконки по желтоватой (щелочной) зоне вокруг каждой колонии.
12.9.2. Бактериологические опыты
Три описанных ниже опыта, в каждом из которых используются приемы асептики, предназначены для того, чтобы овладеть навыками по использованию микробиологических методик. Первый опыт — выращивание культуры молочных бактерий — включает приготовление чашек с агаром и посев бактерий штрихом. Второй — окрашивание по Граму бактерий из опыта 12 Л для их изучения с помощью светового микроскопа. Третий включает подсчет бактериальных колоний с использованием метода серийных разведений.
Опыт 12.1. Изучение содержания бактерий в свежем и несвежем молоке
Цель опыта — установить, как влияет суточное хранение молока при комнатной температуре на его качество и выяснить, почему молоко скисает. Молоко — практически полноценная пища для людей, а предлагаемые опыты показывают, что молоко служит хорошей питательной средой и для целого ряда бактерий.
Материалы и оборудование
Четыре стерильные чашки Петри с питательным агаром
Микробиологическая петля Бунзеновская горелка
Несмываемый маркер или восковой карандаш
Свежее пастеризованное молоко
Несвежее молоко (молоко, простоявшее 24 ч при
комнатной температуре)
Термостат на 35 °С
Методика
1. Простерилизуйте петлю в пламени бунзеновской горелки (подержите ее там, пока она не раскалится докрасна) (рис. 12.4).
ММА им. И.М. Сеченова
2. Остудите петлю и затем погрузите ее в пробу свежего молока, предварительно хорошо взболтав его.
3. Свободной рукой слегка приподнимите крышку стерильной чашки с агаром и легким движением распределите содержимое петли по поверхности агара, как показано нарис. 12.4.
4. Закройте крышку и снова прокалите петлю в пламени горелки.
5. Подпишите донышко чашки несмываемым маркером (или восковым карандашом).
6. Повторите всю процедуру со второй чашкой и другой пробой свежего молока.
7. Снова прокалите петлю и, остудив ее, погрузите в пробу несвежего молока.
8. Распределите содержимое петли по поверхности третьей чашки и закройте крышку.
9. Подпишите донышко чашки несмываемым маркером.
10. Повторите то же самое с четвертой чашкой и второй пробой несвежего молока.
11. Поместите все чашки в термостат и инкубируйте при 35 °С примерно три дня. Прежде чем ставить чашки в термостат, переверните их вверх: дном, чтобы капли конденсата не капали сверху на культуру. После инкубации склейте две половинки каждой чашки липкой лентой, чтобы культура не пропала.
