Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Тейлор Д. -> "Биология в 3 томах. Tом 2" -> 28

Биология в 3 томах. Tом 2 - Тейлор Д.

Тейлор Д. , Грин Н., Стаут У. Биология в 3 томах. Tом 2. Под редакцией Сопера Р. — M.: Мир, 2004. — 436 c.
ISBN 5-03-003686-5
Скачать (прямая ссылка): biolv3tt22004.PDF
Предыдущая << 1 .. 22 23 24 25 26 27 < 28 > 29 30 31 32 33 34 .. 247 >> Следующая

Посев на поверхность агара

Этот метод был уже описан в разд. 12.4.1 (рис. 12.5). Небольшой известный объем культуры наносят на поверхность питательного агара в чашке Петри. Недостатком этого метода является то, что часть культуры остается на поверхности шпателя и в пипетке, поэтому невозможно подсчитать число клеток с высокой точностью. Однако часто это бывает не важно.

Метод основан на том, что каждая бактерия через определенный период времени, например через два дня, даст одиночную колонию. Таким образом, число бактерий в исходной добавленной пробе равно числу колоний, выросших после инкубации. Невооруженным глазом различимы только колонии, состоящие из 100 ООО и

Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут. БИОЛОГИЯ, т. 2

БОТАНИКА

ММА им. И.М. Сеченова

Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут. БИОЛОГИЯ, т. 2

54 Глава 12

Стерильная пипетка на 1 см3

Для разведения Ю-2 внесите 0,1 см3 образца например молока, хорошо перемешайте, а затем перенести 0,1 см3 в следующую пробирку

9,9 см3 стерильной дистиллированной воды Рис. 12.9. Приготовление серийных разведений.

более клеток. Обычно колонии содержат несколько миллионов бактерий.

При условии, что проба содержит не слишком много и не слишком мало бактерий, число колоний можно легко подсчитать, причем для предосторожности лучше не открывать крышку чашки Петри при подсчете. Обычно требуется приготовить серии разведений, так чтобы в одной из серий оказалось идеальное число колоний. Серии разведений — это серии последовательных равномерных разбавлений одного образна (рис. 12.9). Когда найдено подходящее разведение, эксперимент повторяют при данном разведении для повышения точности и воспроизводимости результатов. В эксперименте 12.3 из разд. 12.9.2 число бактерий в пробах молока было установлено с использованием этого метода. Некоторые ограничения метода обсуждаются в конце данного раздела.

Посев заливкой

Этот метод уже был описан в разд. 12.4.1 (рис. 12.6). Принципиально он не отличается от посева на поверхность агара, но в данном случае пробу смешивают с питательным агаром перед заливкой чашек, так что колонии распределяются по всему объему среды, а не растут только по поверхности.

Дрожжи

Подсчет жизнеспособных клеток дрожжей можно проводить с помощью гемоцитометра и метиленового синего. Этот метод более детально описан в следующем разделе.

Проблемы, возникающие при подсчете жизнеспособных клеток

С подсчетом жизнеспособных клеток связан ряд проблем.

1. Некоторые бактерии образуют цепочки или группы клеток, например, стрептококки и стафилококки (рис. 2.10), Каждая группа клеток дает начало только одной колонии. Поэтому иногда результаты подсчета жизнеспособных клеток выражаются не как число бактерий, а как число колониеобразующих единиц.

2. Если присутствует несколько типов бактерий, как, например, в пробах почвы, молока или воды, то условия роста будут не в равной степени благоприятны для каждого типа. Поэтому некоторые бактерии растут гораздо быстрее других, и число видимых колоний будет неадекватно числу бактерий в пробе.

12.6.2. Общее число клеток

Гэмоцитометр

Число бактериальных или дрожжевых клеток в жидкой культуре, например в бульоне, можно прямо подсчитать с помощью микроскопа. Этот метод удобен для подсчета дрожжевых клеток, которые гораздо крупнее бактериальных. При подсчете бактерий необходим объектив с иммерсионным маслом (см. разд. 5.11.2).

БОТАНИКА

ММА им. И.М. Сеченова

Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут. БИОЛОГИЯ, т. 2

Микробиология и биотехнология 55

Обычно для подсчета используют особое предметное стекло, называемое гемоцитометром (рис. 12.10), а сам метод известен как гемоцито-метрия. Чтобы обеспечить прочный контакт между предметным стеклом и покровным стеклом, следует сильно придавить покровное стекло с любой стороны камеры (но так, чтобы не раздавить покровное стекло!). Затем покровное стекло слегка сдвигают до тех пор, пока не покажутся цветные линии (рис. 12,10). Проба жидкости, наносимая пипеткой, затягивается под покровное стекло за счет капиллярного эффекта. Камеру оставляют на 2—3 мин, чтобы клетки осели — это облегчает подсчет. Микроскоп фокусируют на решетке и подсчитывают число клеток на всей решетке, или на ее репрезентативном участке. Нужно насчитать не менее 600 клеток. Если клетки лежат на границе, их можно отнести к квадрату, ограниченному двумя сторонами (например, верхней и правой границами), и не считать их в квадрате, ограниченном двумя другими сторонами, но не следует пытаться считать половинки клеток. Каждый маленький квадрат имеет известную площадь, а глубина жидкости под покровным стеклом является постоянной (обычно 0,02 или 0,1 мм). Следовательно, можно вычислить объем каждой ячейки, и подсчитать число клеток в данном объеме. Если число клеток в каждом квадрате превышает 30, следует развести пробу. Не забывайте при расчетах сделать поправку на разведение.

На решетке, изображенной на рис. 12.10, каждый маленький квадрат имеет размеры 0,05 мм X 0,05 мм = 0,0025 мм2 на общей площади решетки 1 мм2. Если зазор между покровным стеклом и решеткой составляет 0,02 мм, то общий объем над решеткой равен 1 х 0,02 мм = = 0,02 мм3. Можно, следовательно, подсчитать число клеток в данном объеме пробы. Запомните, что 1000 мм3 = 1 см3, а 1000 см3 = 1 дм3 (1л).
Предыдущая << 1 .. 22 23 24 25 26 27 < 28 > 29 30 31 32 33 34 .. 247 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed