Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Тейлор Д. -> "Биология в 3 томах. Tом 2" -> 31

Биология в 3 томах. Tом 2 - Тейлор Д.

Тейлор Д. , Грин Н., Стаут У. Биология в 3 томах. Tом 2. Под редакцией Сопера Р. — M.: Мир, 2004. — 436 c.
ISBN 5-03-003686-5
Скачать (прямая ссылка): biolv3tt22004.PDF
Предыдущая << 1 .. 25 26 27 28 29 30 < 31 > 32 33 34 35 36 37 .. 247 >> Следующая


12. Опишите внешний вид колоний и сравните ваши результаты с описанием из разд. 12.9.1.

Примечания

1. Студенты могут залить чашки самостоятельно, если есть стерильные флаконы Маккартни с расплавленным агаром.

2. При посеве штрихом число бактерий в каждом последующем штрихе постепенно уменьшается. Этот метод удобнее использовать, когда число бактерий в пробе велико, как, например, в молоке. Обычно его используют для выделения чистых колоний бактерий из смешанной культуры.

Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут. БИОЛОГИЯ, т. 2

58 Глава 12

БОТАНИКА

ММА им. И.М. Сеченова

Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут. БИОЛОГИЯ, т. 2

3. После инкубации чашки можно поместить в холодильник и хранить там, пока они не потребуются. Охлаждение препятствует дальнейшему росту бактерий.

4. Когда чашки станут больше не нужны, их следует поместить в пакет для одноразового использования, проавтоклавировать 15 мин и только потом выбросить.

5. С молоком можно провести и другие опыты. Опыт, описанный выше, самый простой. Можно изучить влияние охлаждения. Кроме того, если нетрудно получить пробы сырого (непастеризованного) молока (например, прямо с молочной фермы), можно изучить влияние процесса пастеризации на содержание бактерий в молоке. Для пастеризации сырое молоко разливают в стерильные пробирки, затыкают пробирки ватными пробками, а затем прогревают в течение 35 мин при 63 °С на водяной бане. Третий вариант опыта — инкубировать некоторые чашки при 10 °С, а не при 35 °С. Такая низкая температура благоприятна для роста Streptococcus lactis и не способствует росту Lactobacillus.

Опыт 12.2. Окрашивание бактерий

для изучения их с помощью светового микроскопа

С помощью фазово-контрастного микроскопа можно изучать живые бактерии, однако чаще клетки все же предварительно фиксируют и окрашивают.

Одним из методов окрашивания, который важен для идентификации бактерий, является окрашивание по Граму. До окрашивания бактерии бесцветны. После окрашивания неположительные бактерии становятся фиолетовыми, а Неотрицательные — красными. Различие между двумя типами бактерий описано в разд. 2.3.1 (клеточная стенка).

Материалы и оборудование

Основной краситель — крастиллический фиолетовый (0,5%-ный водный раствор) Протрава — раствор Люголя

Ацетон—спирт (50:50 ацетон !абсолютный спирт) для обесцвечивания

Дополнительный краситель — сафранин (1%-ный водный раствор)

_Микробиология и биотехнология 59

Проволочная петля Бунзеновская горелка

Тщательно вымытые предметные стекла (протертые спиртом)

Пинцет

Штатив для окрашивания, помещенный над кюветой или чашкой

Промывалка с дистиллированной водой Фильтровальная бумага

Иммерсионное масло и микроскоп с иммерсионным объективом

Методика

(Этапы 1—6 должны занимать не более 5 мин) (Из кн.: Bacteriology, J. Humphries, John Murray, 1974.)

1. Приготовьте мазок бактерий на предметном стекле. Для этого прокалите проволочную петлю в пламени горелки и охладите ее. Капните 1—2 капли воды в центр чистого стекла. Слегка коснитесь проволочной петлей выбранной вами бактериальной колонии, полученной в предыдущем эксперименте; чашку приоткрывайте как можно меньше, чтобы не загрязнить культуру. Перенесите клетки на предметное стекло и осторожно перемешайте петлей. Размажьте клетки по предметному стеклу в виде тонкой пленки, чтобы получилось пятно площадью 3 х 1 см. Снова прокалите петлю. Очень важно добиться нужной толщины мазка. Он должен чуть-чуть опалесцировать и чаще получается слишком толстым, а не слишком тонким. Толщина мазка должна быть одинакова по всей поверхности. Дайте мазку полностью высохнуть на воздухе (несколько минут).

2. Зафиксируйте бактерии. Возьмите предметное стекло пинцетом и в горизонтальном положении проведите его три раза через желтую часть пламени бунзенов-ской горелки. Важно не перегреть стекло. Проверьте правильность нагрева следующим образом: после каждого проведения через пламя слегка коснитесь стеклом руки. Если оно не слишком горячее, то все делается правильно. При фиксации бактериальные клетки гибнут в результате коагуляции цитоплазмы и прилипают к стеклу.

БОТАНИКА

ММА им. И.М. Сеченова

Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут. БИОЛОГИЯ, т. 2 60 Глава 12

3. Окрашивание бактерий. При окрашивании очень легко запачкать поверхность стола, поэтому процедуру лучше проводить на штативе, размещенном над кюветой или кристаллизатором. Штатив можно сделать из двух стеклянных или металлических палочек, положив их строго горизонтально на края кюветы или кристаллизатора на расстоянии 5 см друг от друга. Закрепите палочки пластилином. Залейте стекло раствором кристаллического фиолетового и оставьте на 30 с. Все бактерии окрасятся в фиолетовый цвет.

4. Смойте краситель раствором Люголя; для этого залейте стекло этим раствором и оставьте на 30 с. Смойте йод дистиллированной водой из промывалки. Йод более прочно связывает краситель внутри клеток.

5. Промывайте стекло смесью ацетон-спирт до тех пор, пока не перестанет отходить краситель (примерно 3 с); после этого немедленно промойте стекло водой, чтобы препарат совсем не обесцветился. Если нужно, повторите эту процедуру (умение определять продолжительность отмывки приходит только с опытом). После отмывки обесцвечиваются грамотрицательные бактерии. Грамположительные бактерии остаются фиолетовыми.
Предыдущая << 1 .. 25 26 27 28 29 30 < 31 > 32 33 34 35 36 37 .. 247 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed