Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Тейлор Д. -> "Биология в 3 томах. Tом 2" -> 32

Биология в 3 томах. Tом 2 - Тейлор Д.

Тейлор Д. , Грин Н., Стаут У. Биология в 3 томах. Tом 2. Под редакцией Сопера Р. — M.: Мир, 2004. — 436 c.
ISBN 5-03-003686-5
Скачать (прямая ссылка): biolv3tt22004.PDF
Предыдущая << 1 .. 26 27 28 29 30 31 < 32 > 33 34 35 36 37 38 .. 247 >> Следующая


6. Залейте стекло сафранином и оставьте на 1 мин. Отмойте краситель водой. Осторожно просушите стекло между слоями чистой фильтровальной бумаги и дайте ему окончательно высохнуть на воздухе. Сафранин является дополнительным красителем. Он применяется после кристаллического фиолетового и окрашивает все грамотрицательные бактерии в красный цвет.

7. Нанесите на мазок каплю иммерсионного масла и рассмотрите препарат под иммерсионным объективом (разд. 5.11.2).

Результаты

Согласуются ли ваши наблюдения с тем, что написано в разд. 12.9.1 о содержании бактерий в молоке?

Опыт 12-3. Сравнение численности бактерий в свежем и несвежем молоке

Если одиночную бактерию поместить на питательный агар, она начнет делиться и образует колонию, которая в отличие от исходной клетки видна невооруженным глазом. Это свойство можно использовать для подсчета бактерий.

Простерилизуйте оборудование. Первая часть опыта основана на использовании метода серийных разведений. Число бактерий в молоке огромно, поэтому для подсчета удобнее взять пробу небольшого объема и развести ее в известное число раз. Приготовьте серии разведений. Во второй части опыта из каждого разведения отберите пробу для посева. Для подсчета числа бактерий в определенном объеме молока (т. е. титра) используйте ту чашку, на которой после инкубации выросло наиболее подходящее число колоний (достаточно большое, но без перекрывания колоний).

Материалы и оборудование

Шесть стерильных чашек с питательным агаром

Восемь градуированных пипеток на 1 см3

Градуированная пипетка на 10 см3

Шесть пробирок и штатив для них

Хлопковая вата

Печь на 160 °С

Несмываемый маркер

Бунзеновская горелка

100 см3 дистиллированной воды

Свежее молоко

Несвежее молоко

70%-ный спирт

Алюминиевая фольга

Стеклянный шпатель

Стерилизация оборудования

1. Закройте каждую из шести пробирок ватной пробкой; пробки плотно оберните алюминиевой фольгой.

2. В кончик каждой из восьми пипеток на 1 см3 и одной пипетки на 10 см3 поместите небольшой комочек ваты и заверните каждую пипетку отдельно в алюминиевую фольгу.

3. Положите пробки и пипетки в горячую суховоздушную печь, нагретую до 160 0C, и оставьте их там на 60 мин (колбы со сре-

БОТАНИКА

ММА им. И.М. Сеченова

Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут. БИОЛОГИЯ, т. 2

дой и водой в такой печи стерилизовать нельзя).

4. Перед использованием дайте оборудованию остыть.

Серийное разведение молока и посев клеток на чашки с агаром

1. Подпишите шесть стерильных, закрытых пробками пробирок, пометив их Cl, С2, СЗ, Hl, Н2 и НЗ. Снимите с пробок алюминиевую фольгу.

2. Подпишите донышки шести стерильных чашек с питательным агаром Cl, С2, СЗ, Н1,Н2иНЗ.

3. Внесите в каждую из шести пробирок по 9,9 см3 стерильной дистиллированной воды. Для этого воспользуйтесь следующими приемами.

а) Мизинцем и безымянным пальцем одной руки выньте ватную пробку из колбы со стерильной дистиллированной водой.

б) Держа пробку одной рукой, другой рукой возьмите стерильную пипетку на 10 см3 и наберите из колбы 9,9 см3 стерильной дистиллированной воды.

в) Закройте колбу пробкой.

г) Точно таким же способом, как в пункте я, выньте пробку из первой пробирки.

о) Перенесите 9,9 см3 воды в эту пробирку.

ё) Закройте пробку.

ж) То же самое проделайте с остальными пятью пробирками.

4. Хорошо встряхните пробу свежего молока и, взяв стерильную пипетку на 1 см3, перенесите 0,1 см3 молока в пробирку Cl. Пробку вынимают и помещают обратно так же, как и раньше. Получается разведение в 100 раз.

5. Мягко встряхните пробирку, чтобы хорошо перемешать содержимое.

_Микробиология и биотехнология 61

6. Возьмите новую стерильную пипетку и перенесите 0,1 см3 из пробирки Cl в стерильную чашку, помеченную Cl, лишь слегка приоткрывая крышку чашки.

7. Простерилизуйте стеклянный шпатель; для этого окуните его в 70%-ный спирт, дайте стечь избытку спирта и затем подержите шпатель вертикально в пламени бун-зеновской горелки.

8. Дайте шпателю остыть и холодным шпателем разотрите пробу молока по поверхности чашки.

9. Снова простерилизуйте шпатель.

10. Используя ту же пипетку, что и в пункте 6, перенесите 0,1 см3 из пробирки Cl в пробирку С2, вынув и поместив ватную пробку на место, как указано выше.

11. Хорошо перемешайте пробу, встряхнув пробирку С2. Получается разведение в 10 000 раз.

12. Повторите операции, указанные в пунктах 10—11, используя СЗ вместо С2. Это дает разведение в 1 000 000 раз. Повторите операции, указанные в пунктах 6—9, используя СЗ вместо Cl.

13. Повторите серийные разведения, используя в качестве проб несвежее молоко, и приготовьте чашки Hl, Н2 и НЗ.

14. Переверните приготовленные шесть чашек донышками вверх и поставьте примерно на 3 сут в термостат при 35 °С.

15. Скрепите крышки и донышки чашек липкой лентой, чтобы избежать возможного распространения патогенных микроорганизмов.

16. Оцените рост бактерий на чашках. Где удастся, подсчитайте число отдельных колоний. Запишите полученные результаты в виде таблицы и рассчитайте по ним число бактерий в 1 см3 неразбавленного молока.
Предыдущая << 1 .. 26 27 28 29 30 31 < 32 > 33 34 35 36 37 38 .. 247 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed