Биология в 3 томах. Tом 2 - Тейлор Д.
ISBN 5-03-003686-5
Скачать (прямая ссылка):
БОТАНИКА
ММА им. И.М. Сеченова
Заполните петлю культурой, если она находится в жидкой среде.
Прикоснитесь к культуре петлей, если она находится на твердой среде.
Приоткройте крышку чашки Петри, насколько требуется,
и легким касанием распределите пробу, как показано на рисунке,
не повреждая поверхность агара.
Беритесь за ручку петли примерно в середине
(в точке равновесия) и держите петлю плоско.
Каждая линия обозначает один штрих проволочной петлей.
Прокаливайте и охлаждайте петлю после каждой серии из шести линий.
Еще раз прокалите петлю е конце. Подпишите донышко чашки*.
Инкубируйте чашки в перевернутом положении,
чтобы избежать попадания конденсата на культуру
* Подписывание чашек
•Дата
- Инициалы
- Содержимое
Если вы подписываете в зеркальном отображении, то надпись можно будет прочитать через крышку
Рис. 12.4. Посев штрихом, или разведение культуры.
Вид чашки после инкубации
Колонии, выросшие из Отдельных бактерий
Если необходимо, то процесс можно повторить, взяв одну из этих колоний, чтобы убедиться в их чистоте Таким способом можно получить чистую культуру
БОТАНИКА
ММА им. И.М. Сеченова
Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут. БИОЛОГИЯ, т. 2
Микробиология и биотехнология
49
А. Поместите шпатель в небольшой стакан с этиловым спиртом
Стеклянный шпатель
70% спирт
(воспламеняющийся, держите подальше от бунзеновской горелки)
Б. Перенесите небольшой фиксированный объем (до 0,5 см3) суспензии клеток на поверхность питательного агара в чашке Петри. Груша на конце пипетки помогает контролировать точность переноса.
Пробка из хлопковой ваты для предотвращения загрязнения
из груши
еньте \
Питательный агар
Наденьте резиновую грушу непосредственно перед
использованием
В. Выньте шпатель из спирта и дайте стечь избытку спирта
Г. Распределите жидкость по поверхности агара с помощью шпателя, одновременно поворачивая чашку, чтобы покрыть всю поверхность. Подпишите донышко чашки и инкубируйте ее.
Подожгите спирт, пронеся шпатель через пламя
бунзеновской горелки. Не оставляйте шпатель в пламени,
так как он может треснуть. (Спирт возгорается при температуре,
значительно меньшей, чем температура пламени бунзеновской горелки.)
После того как спирт прогорит, остудите шпатель в течение 10 с.
После использования храните шпатель в стакане.
Д. Вид чашки после инкубации
Колонии
на поверхности
агара
Подсчитайте число колоний. Это число соответствует количеству исходно инокулированных бактерий.
Рас. 12.5. Посев на поверхность агара.
Определенный объем (до 0,5 см3) клеточной суспензии вносят в подходящий объем {около ] 5—20 см-1) простерилизованного расплавленного в небольшом флаконе питательного агара, который предварительно был охлажден до 45-50 °С в водяной бане. Снимают крышку и
перед добавлением клеточной суспензии прожигают горлышко флакона, как показано на рис. 12.3, А и Б. Суспензию клеток тщательно перемешивают с питательным агаром, поворачивая (не встряхивая) назад и вперед зажатый в ладонях флакон (рис. 12.6, А). Затем выливают
БОТАНИКА
ММА им. И.М. Сеченова
Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут. БИОЛОГИЯ, т. 2
50
Глава 12
Колонии, распределенные в среде случайным образом
Рис. 12.6. Посев заливкой.
смесь в стерильную чашку Петри, как показано на рис. 12.3, В. Подписывают донышко чашки и инкубируют ее. После инкубации чашка выглядит, как показано на рис. 12.6, Б.
Посев уколом
Метод используют для культивирования анаэробных организмов или организмов, растущих при низкой концентрации кислорода (микро-аэрофилов). Обычно используют пробирку с питательной агаризованной средой. Благодаря небольшой поверхности и достаточно большой глубине агара в пробирке по сравнению с чашкой доступ кислорода внутрь агара ограничивается. Посев производят прямой проволочкой (без петли), или бактериологической иглой. Небольшое количество культуры (твердой или жидкой) берут кончиком иглы и затем вертикально прокалывают ею агар (рис. 12.7). Культура растет в агаре во все стороны от линии прокола.
12.4.2. Посев в жидкую среду
Если клетки, которые собираются высевать, находятся в жидкости, например в воде, молоке или бульоне, то для переноса пробы в пробирку с питательной средой используют проволочную петлю. Петлю погружают в среду и мягко взбалтывают ее. Не забывайте прокаливать горлышко флакона, если снимаете крышку или удаляйте ватную пробку.
Если засеваемая культура находится внутри или на поверхности твердого субстрата, например почвы или питательного агара, то можно также использовать проволочную петлю для посева в жидкую среду. Для успешного переноса достаточно потереть петлю о внутреннюю поверхность сосуда с питательной средой.
В обоих случаях для перемешивания культуры пробирку с засеянной жидкой средой можно слегка потрясти.
12.5. Рост бактерий
Бактериологическая игла
Питательный агар
Рис. 12.7. Посев уколом.
Пробка из .хлопковой ваты
Рост микроорганизмов ближе к поверхности подавляется кислородом. Так бактерии распределяются после исходного посева уколом
