Биология в 3 томах. Tом 2 - Тейлор Д.
ISBN 5-03-003686-5
Скачать (прямая ссылка):
При подсчете клеток дрожжей можно использовать краситель метиленовый синий. При этом в синий цвет окрашиваются только мертвые клетки. Живые клетки активно выводят краситель из клетки. Таким образом, можно подсчитать число жизнеспособных клеток, если учитывать только бесцветные или бледно-голубые клетки.
Измерение мутности
Метод, называемый нефелометрией, в принципе прост. Чем больше клеток в суспензии, тем
Край покровного стекла, лежащего на предметном стекле
Зазор 0,02 мм или 0,1 мм глубиной под покровным стеклом, в котором содержится жидкая проба (см. ниже)
Сюда добавляется небольшой объем пробы (конец пипетки находится у покровного стекла)
/Решетка для подсчета, Покровное 0 / выгравированная
И / на предметном стекле
Бороздка (проба не должна вытекать в бороздку)
Эта часть предметного стекла расположена немного ниже (0,02 мм или 0,1 мм)
В
Цветные линии
(кольца Ньютона); они появляются, когда покровное стекло расположено достаточно близко к предметному
0,2 мм
Деталь решетки, содержащая 400 маленьких квадратов
0,2 мм
Рис. 12.10. Гемоцитометрия.
выше ее мутность, или «затемненность», степень которой можно измерить.
Проще всего использовать набор стандартных пробирок (броуновские пробирки), которые имеются в продаже. Они содержат суспензии сульфата бария в различных концентрациях, от прозрачной (пробирка 1) до непрозрачной (пробирка 10). Образец суспензии исследуемых микроорганизмов помещают в идентичную пробирку и подбирают одну из стандартных
БОТАНИКА
пробирок, подходящую по мутности суспензии. К набору стандартных пробирок прилагается таблица, позволяющая по мутности рассчитать концентрации клеток для широкого спектра различных микроорганизмов.
Можно также мутность измерять как долю пропускания света (или оптическую плотность) суспензией с использованием колориметра или спектрофотометра. Клеточная масса прямо пропорциональна оптической плотности. Лучше всего использовать красный свет (красный фильтр), поскольку он не интерферирует с желтоватым цветом многих культуральных сред.
При измерении мутности возможны ошибки, если растущие клетки образуют комки (см. раздел, посвященный подсчету жизнеспособных клеток). Наиболее точные результаты получают в тех случаях, когда плотность популяции не слишком высокая и не слишком низкая. Для получения идеальной плотности клеток (106 -—10'" клеток* см-3) иногда требуется разведение проб.
12.6.3. Неколичественные методы
Можно использовать и другие методы измерения роста микроорганизмов. Например, у грибов можно измерять рост как увеличение диаметра мицелия с течением времени. Этот метод был бы удобен при изучении влияния температуры на рост грибов, или при изучении действия ингибиторов в среде. Если гриб выращивают в жидкой среде, то можно отфильтровывать или отцентрифугировать пробы культуры через определенные интервалы времени и измерять массу свежего или высушенного мицелия.
12.7. Окрашенные бактерии — окрашивание по Граму
С помощью фазово-контрастного микроскопа можно увидеть живые бактерии, однако чаще бактерии предварительно фиксируют и окрашивают.
Одним из методов окрашивания, позволяющим идентифицировать бактерии, является окрашивание по Граму. Впервые этот метод был предложен датским врачом Кристианом Грамом в 1884 г. До окрашивания все бактерии бесцветны. После окрашивания грам положительные бактерии становятся фиолетовыми, а грамотри-цательные бактерии — красными. Различия
ММА им. И.М. Сеченова
между этими двумя типами бактерий описаны в разд. 2.5.1 (клеточная стенка).
Детали процедуры окрашивания даны в эксперименте 12.2 в разд. 12.9.
12.8. Культивирование вирусов
Культивирование, или выращивание, вирусов — процедура более сложная, чем выращивание бактерий, потому что вирусы растут и размножаются только внутри живых клеток. Можно инфицировать целый организм, например растение или животное, однако сейчас стараются, где это возможно, использовать культуры клеток или тканей (рис. 12.11). Раньше использовали метод культивирования определенных вирусов в куриных эмбрионах во время их роста внутри яйца. Сходная процедура выращивания вирусов в амниотической жидкости, окружающей куриный эмбрион, применялась при изготовлении вакцин против свинки и гриппа.
Культура клеток — это суспензия клеток в жидкой среде, а культура тканей это маленькие кусочки органа растения или животного в жидкой или на твердой среде. В культуре клеток рас-
Рнс. 12.11. Культуры клеток для выращивания вирусов, инкубируемые в стерильной термальной комнате.
Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут. БИОЛОГИЯ, т. 2
56 Глава 12
БОТАНИКА
ММА им. И.М. Сеченова
Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут. БИОЛОГИЯ, т. 2
тений обычно используют меристемы, т. е. такие участки, как кончики корня или побегов, где клетки активно делятся. Материал можно взять с зараженного растения, либо инфицировать культуру подходящим вирусом. Культуру клеток животных обычно получают путем выращивания отдельных клеток в виде одного слоя на поверхности стеклянного контейнера (моно-елойная культура). Полиовирус был впервые выращен в такой культуре, полученной из почки обезьяны. Для получения культуры ткани использовались также клетки из легких, амниона и раковых опухолей человека.
