Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
Важными факторами, определяющими поведение клеток в суспензионных культурах, служат глубина слоя питательной среды и клеточная плотность. Роль этих факторов легко контролируется. Различные модификации метода суспензионных культур обеспечивают постоянное движение клеток, которое достигается в результате вращения, помешивания, встряхивания клеточной суспензии, продувания через среду потоков газа (Osgood, Muscovitz, 1936; Clemmesen et al., 1948; Ruddle et: al., 1958, и др.). Клетки в этих условиях находятся во взвешенном состоянии, не прикрепляются к поверхности стекла. В некоторых случаях предусмотрено постоянное обновление и жидкой и газовой фазы.
В ходе эксперимента может проводиться забор про0 среды со взвешенными в ней клетками и приготовление мазков для цитологического анализа.
В большинстве случаев метод суспензионных культур применяется для количественного изучения процессов клеточного метаболизма и проведения биохимических исследований, требующих большого количества материала, а также используется в онкологии для получения стабильных линий из лейкемической крови и костного мозга. В последнее время применение этого метода позволило получить важные данные по антителообразованию in vitro (см. стр. 131).
В суспензионных культурах периферической крови человека (Mackinney a. oth., 1962) в течение 36 часов количество жизнеспособных клеток уменьшается на 55%, а затем на протяжении последующего времени (до 60 часов) остается постоянным.
В первые сутки культивирования происходит дегенерация эозинофилов и базофилов. На мазках, приготовленных из проб культуральной среды, обнаруживается два типа клеток: малые лимфоциты и моноцитоидные элементы, которые, судя по их количеству, являются продуктом трансформации лимфоцитов. Через 24 часа на мазках обнаружи-
ваются в большом количестве клеточные элементы, имеющие морфологию лимфоцитов, с базофильной, вакуолизиро-ванной цитоплазмой. Крупные мононуклеарные клетки появляются в мазках 26 — 72-часовых культур. Их диаметр в 2—3 раза превышает диаметр малого лимфоцита. Они характеризуются овальным или круглым ядром, обширной ва-куолизированной цитоплазмой.
Опыты с введением Н3-тимидина в среду таких культур на 2 часа показали, что если ввести изотоп в культуру в момент посадки, то метится в среднем 0,2% клеток в популяции. В дальнейшем процент меченых клеток практически не нарастает, хотя в течение 2 — 3 суток культивирования обнаруживается значительное количество митозов. Если же вводить Н3-тимидин после первых 24 часов культивирования, то процент меченых клеток начинает возрастать. При введении изотопа через 42 часа на срок 4 часа оказываются мечеными 10% клеток. Из этих наблюдений следует, что клеточная пролиферация, наблюдаемая после 24 часов, поддерживается не за счет клеток, находившихся в синтетическом (S) периоде в момент эксплантации, а за счет клеток, которые в условиях культуры постепенно входят в синтетическую фазу и начинают делиться. В целом следует еще раз напомнить, что применительно к клеткам нормальной крови и лимфоидной ткани суспензионные культуры остаются пока моделью, позволяющей проводить лишь непродолжительные эксперименты. В то же время существует ряд проблем, для изучения которых суспензионные культуры могут служить особенно удобной моделью. Это, в частности, относится к дальнейшему анализу природы лейкоцитарных трефо-нов — ростстимулирующих веществ, выделяемых в культуральную среду лейкоцитами. Интересные исследования, которые проводились на эту тему Г. К. Хрущовым (1945) и были незаслуженно прерваны, очевидно, еще ждут своего продолжения.
4. ОРГАННЫЕ КУЛЬТУРЫ ЛИМФОИДНОЙ ТКАНИ
При подборе соответствующего поддерживающего субстрата и питательной среды метод органных культур позволяет длительно выращивать лимфоидную ткань вне организма с сохранением и даже регенерацией ее структур и поддержанием нормальных гистогенезов. Такая возможность была показана нами при использовании метода множественных органных культур.
При культивировании тимуса новорожденных мышеи в чашке Конвея на миллипорных фильтрах НА (размер пор 0.45 мк) на питательной среде, состоящей из 75% среды 199, 20% инактивированной бычьей сыворотки, 5% куриного эмбрионального экстракта, глюкозы, витамина С и антибиотиков, происходит интенсивная миграция тимоцитов, которые через 2 суток культивирования образуют вокруг высаженного кусочка широкий вал. превосходящий в своем диаметре размер эксплантата в 3- 4 раза (Е. А. Лурия, 1966). Выселившиеся лимфоциты быстро дегенерируют. Деструктивные изменения захватывают и центральные участки эксплантата. Жизнеспособной остается лишь периферия кусочка, где среди крупных клеток стромы. которые образуют широкопетлистую сеть, диффузно располагаются неповрежденные лимфоциты. Следует отметить, что в областях сохранения лимфоцитов в краевой зоне в заметном количестве присутствуют и тучные клетки. Сам эксплантат эинтелизи-руется покрывается одно-двухслойным эпителиальным пластом (рис. 27.). от которого внутрь кусочка отходят клеточные тяжи и ответвления, формирующие небольшие цисты.
