Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
В целом вопрос о наличии клеток-предшественников для соединительной ткани среди элементов крови оказался более сложным, чем казалось первоначально. Между тем его решение имеет принципиальное значение для ряда важных проблем гематологии и иммунологии и для анализа структуры популяций тканей внутренней среды. Эксплантация лейкоцитов периферической крови в монослойные культуры позволила получить ценные сведения по данному вопросу (см. ниже).
Периферическая кровь — это не единственная популяция свободных клеток, которая дает in vitro рост гистиоцитов и фибробластов. А. А. Максимов упоминает о том, что в 1917 г. ему удалось получить колонии фибробластов из клеток перитонеального экссудата. В последующем эти данные были подтверждены Верещинским (1924, 1925).
Наиболее гомогенной системой, использованной для изучения трансформаций лимфоцитов в плазменных культурах, служат клетки лимфы из ductus thoracicus (Bloom, 1927, 1928). Bloom культивировал в плазменном сгустке лимфоциты, полученные из ductus thoracicus кролика (1927, 1928). Основными клеточными элементами в исходном эксплантате были большие и малые лимфоциты с незначи-
тельной примесью эритроцитов, эозинофильных лейкоцитов и иногда моноцитов (последние составляют менее 1%). За несколько часов на смену лимфоцитам приходят более крупные клетки с увеличенным содержанием нейтрального красного Ti липоидными включениями. К концу первых суток многие неизмененные лимфоциты начинали дегенерировать. Через неделю в таких культурах образуются небольшие колонии фибробластов с незначительной примесью макрофагов.
Так же ведут себя культуры лимфы, полученной из эфферентных лимфатических сосудов мезентериальных лимфатических узлов кролика. В исходном материале в этом случае содержатся практически чистые малые лимфоциты. И здесь создается впечатление о трансформации лимфоцитов в макрофаги, а затем и в вытянутые элементы, имеющие морфологию фибробластов (Bergel, 1930). Эти результаты, полученные учениками А. А. Максимова, соответствуют его генеральной идее о лимфоцитах как об исходных элементах для развития гистиоцитов и фибробластов в культурах. В настоящее время этот вопрос приобрел особенную остроту в связи с проблемой стволовой кроветворной клетки (см. ниже).
2. МОНОСЛОЙНЫЕ КУЛЬТУРЫ ЛИМФОИДНОЙ
ТКАНИ И КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ
Суспензии клеток лимфоидных органов, высаженные в монослойные культуры, не дают возможности получить длительно сохраняющиеся культуры лимфоцитов. Большинство клеток, прикрепляющихся к поверхности стекла, трансформируется в макрофаги и гистиоциты, которые затем могут замещаться на популяцию фибробластоподобных клеток (рис. 23).
Изменения клеточного состава в монослойных культурах лимфоидных клеток могут быть прослежены на примере культуры клеток селезенки морских свинок (Р. К. Чайла-хян, 1970). Последовательные фазы происходящих здесь изменений хорошо согласуются с теми, которые наблюдал А. А. Максимов в плазменных культурах. В первые дни культивирования возникает популяция гистиоцитов-макро-фагов с незначительной примесью мононуклеаров и сегментоядерных лейкоцитов, находящихся на различных стадиях дегенерации. Уже на 6-й день появляются и очаги фибробластоподобных клеток. Очаги состоят из крупных клеток
с большим ядром, одним или несколькими ядрышками и обширной цитоплазмой. По своей морфологии фибробласты напоминают клетки диплоидных штаммов человека. На 6-й день диаметр очагов составляет 0,8—1,2 мм, в среднем в очаге содержится по 200 клеток, на 9-й день диаметр очагов 1—1,8 мм (среднее количество клеток 600), к 12-му дню очаги увеличиваются до 1,5—2,5 мм в диаметре и содержат в среднем по 1500 клеток. После 20-го дня фибробластопо-добные клетки полностью вытесняют популяцию гистиоцитов-макрофагов.
Каждый такой очаг является клеточным клоном, т. е. происходит из одной клетки-предшественника (Р. К. Чайла-хян, А. Я. Фриденштейн, А. В. Васильев, 1970), На это указывают данные, полученные методом хромосомного анализа, проведенного на очагах, возникающих в монослойных культурах от двух доноров, различающихся по половому хроматину. Кроме того, указанием на клональную природу очагов служит линейная зависимость между количеством очагов и числом эксплантированных клеток, которая проявляется при количестве эксплантированных клеток, не превышающем 107 на флакон емкостью в 100 мл. Была определена величина КОЕ, т. е. того количества эксплантированных клегок, на которое приходится одна колония. Для культур селезенки морской свинки КОЕ составляет 105. Это значит, что среди 105 клеток присутствует один предшественник, который дает начало колонии фибробластов в условиях монослойных культур.
Образование колоний фибробластов наблюдается также при эксплантации клеточных суспензий из других лимфоидных органов морской свинки: тимуса и лимфатических узлов и при культивировании клеток перитонеального экссудата (Е. А. Лурия и др., 1972), а также селезенки мышей (рис. 23). И хотя фаза макрофагального роста при эксплантации суспензии из тимуса и лимфатических узлов почти полностью выпадает, динамика образования и роста колоний представляется сходной во всех случаях.
