Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
Таким образом в перечисленных клеточных популяциях содержатся клетки-предшественники для колоний фибробластов. Их концентрация (судя по результатам клонирования in vitro), составляет у морских свинок (на 105 клеток) : 9 — для клеток перитонеального экссудата, 0,5 — для клеток селезенки, 0,2 — для клеток лимфоузлов, 0,05 — для клеток тимуса. Эти концентрации могут сильно изменяться. Например, для перитонеального экссудата через 20 дней
аГ,* fЪл'** *¦' > > i Л'/ '
'М •«
Рис. 23, а, б. Колонии фибробластов в монослойных культурах клеток селезенки ми-шей (по Г II Кузьменко н Д. Я. Фриден-штейну).
после подкожного введения адъюванта Фрейнда концентрация этих клеток возрастает в 70 раз. Клетки, образующие в культурах лимфоидной ткани колонии фибробластов, относятся к категории стромальных клеток-предшественников. Клонирование in vitro позволило выявить эту новую категорию клеток и дало возможность оценивать изменение их содержания в лимфоидных органах при различных условиях. Это тем более важно, что такие клетки-предшественники, как оказалось, циркулируют в крови (см. ниже), и поэтому можно ожидать, что они мигрируют внутри кроветворной и лимфоидной ткани.
Рис. 24. и, и. Колонии фнб-робластов в монослоиных культурах лейкоцитов периферической крови.
При эксплантации лейкоцитов кропи морской свинки в монослойные культуры к 10 -14-му дню также наблюдается образование колоний фибробластоподобных клеток (рис. 24) (Д. Ф. Панасюк и др., 1970). В течение первых суток культивирования на стекле обнаруживаются все клеточные элементы крови, большая часть которых в последующем дегенерирует. Немногие сохранившиеся клетки имеют морфологию гистиоцитов. Уже на 2-е сутки появляются первые колонии фибробластов, состоящие из нескольких клеток. На 1-и день количество таких колоний возрастает, при этом они увеличиваются в размере. На 10 12-й день нево-
4»'* * ¦ *
4 “ % «
# в*** -
\l|^
Рис. 2Г>. Состав отдельном колонки и 12-дценной культуре клеток периферической крови
оружейным глазом видны крупные колонии фибробластов. содержащие до нескольких тысяч клеток (рис. 24, 25). Колонии состоят из типичных фибробластов, образующих коллагеновые волокна и содержащих тонофибриллы в цитоплазме. Выявляется четкая линейная зависимость между числом очагов п количеством гксплантированных клеток. Колониеобразующая единица для культур лейкоцитов крови у морских свинок колеблется от 2,5• 1 O'* до 3-10;\ Важно отметить, что количество пункций сердца в процессе взятия крови не изменяет величины колониеобразующей единицы (табл. (5). Это доказывает, что клетки-предшественники для фибробластов действительно присутствуют в периферической крови, а не заносятся в нее при пункции, как это часто предполагалось.
Введение Н3-тнмнднна в 7- и 11-дневные культуры кле ток крови позволило определить пролиферативный пул (рис. 26) и время генерации фибробластов в колониях. Для этого использовались кривые насыщения с учетом, что речь идет о логарифмически растущей клеточной популяции. Индекс метки фибробластов за 15 минут, который отражает процент клеток, находящихся в S-периоде, оказался равным 18%. Пролиферативный пул для 7- и 11-дневных культур оказался не менее 84 и 79%. Из приведенных данных следу-
Рис. 26. Включение Н’-тимнлнна в клетки колоний в культурах периферической крови.
ет, что среднее время генераций (Т) для фибробластов в 7-дневнмх культурах составляет не менее 34,5 часа и не более 39,3 часа, а в 11-дневных культурах — не менее 3(5 часов и не более 13,4 часа (Е. А. Лурия, А. Ф. Панасюк, А. Я. Фриденштейн, 1971).
Интересно отметить, что близкие параметры были получены для фибробластов в культурах костного мозга морской свинки (II. В. Кейлис-Борок и др., 1971).
Таким образом, монослойные культуры позволяют проводить количественный учет клеток-предшественников для колоний фибробластов в различных популяциях лимфоидных клеток. Так как во всех случаях концентрация клеток-предшественников крайне низка, их морфологический поиск в исходном материале представляет значительные трудности и требует разработки новых экспериментальных подходов.
Остается также неясным, проходят ли колоииеобразую-щне клетки-предшественники при эксплантации в культуры морфологическую стадию гистиоцита-макрофага. Тот факт, что в культурах клеток тимуса, лимфатических узлов и лимфоцитов из грудного протока (Bloom, 1927, 1928) образование фибробластов наблюдается практически без стадии гистиоцита риого роста популяции, вызывает дополнительные сомнения в том, что гистиоцит-макрофаг является стадией в образовании фибробласта.
Таблица б
Образование колоний фибробластов в монослойных культурах лейкоцитов крови (по Е. А. Лурия, А. Ф. Панасюку,
А. Я. Фриденштейну, 1971)
Донор Количество Число ЭКО на Доиор Кол ичество Число ЭКО на
эксплантиро* КОЛО 105 кле экспл актиро коло 10“ кле
ванных клеток НИЙ ток ванных клеток ний ток
