Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Реактивы: 10%-ный раствор цинка сульфата. 10 г вещества растворяют в 90 мл дистиллированной воды;
0,5 моль/л раствор натрия гидроксида. 20 г натрия гидроксида вносят в мерную колбу на 1 л и доливают бидистиллированной водой до метки;
2 моль/л раствор натрия карбоната. 21,2 г натрия карбоната безводного растворяют в мерной колбе на 100 мл и доводят до метки бидистиллированной водой;
2 моль/л раствор соляной кислоты. Фиксанал соляной кислоты разводят бидистиллированной водой в мерной колбе на 500 мл или берут 82 мл концентрированной соляной кислоты (плотность 1,19) и доводят бидистиллированной водой до 500 мл;
10%-ный раствор серной кислоты. К 94,5 мл дистиллированной воды приливают 5,5 мл концентрированной серной кислоты (плотность 1,84);
раствор мышьяковистого ангидрида. 3,8 г мышьяковистого ангидрида растворяют в 50 мл 1 моль/л раствора натрия гидроксида, добавляют 50 мл бидистиллированной воды и доводят объем до 500 мл 1,75 моль/л раствором серной кислоты. Ядовит. Хранят в темном месте в эксикаторе;
1,75 моль/л раствор серной кислоты. 97,7 мл концентрированной серной кислоты (плотность 1,84) доводят до 1 л бидистиллированной водой;
калибровочный раствор йода. Раствор А готовят из фиксанала калия йода. В 1 мл 0,1 моль/л раствора калия йода содержится 12,68 мг йода. Раствор В: 2 мл раствора А доводят бидистиллированной водой до 1 л. В 1 мл раствора содержится 25,38 мкг йода. Раствор С: 0,4 мл раствора В доводят бидистиллированной водой до 500 мл. В 1 мл содержится 0,202 мкг йода. Раствор D: 10 мл раствора С доводят бидистиллированной водой до 100 мл. В 1 мл содержится 0,02 мкг йода;
раствор церия сульфата. Берут 39 г аммоний-церий-сульфата и растворяют в 1 л 1,75 моль/л раствора серной кислоты;
1 моль/л раствор натрия гидроксида. 40 г натрия гидроксида в мерной колбе доводят бидистиллированной водой до 1 л.
Оборудование: фотоэлектроколориметр; кварцевые пробирки центрифужные; ультратермостат или водяная баня, поддерживающая температуру 37 °С; секундомер; муфельная печь.
Ход определения. В кварцевую центрифужную пробирку вносят 1 мл сыворотки крови, 7 мл бидистиллированной воды, 1 мл 10%-ного раствора цинка сульфата и 1 мл 0,5 моль/л раствора натрия гидроксида. После внесения каждого реактива тщательно перемешивают стеклянной палочкой. Через 30 мин центрифугиру-
207
ют в течение 15 мин при 3000 мин . Надосадочную жидкость осторожно сливают. Осадок трижды промывают 10 мл бидистилли-рованной воды с последующим центрифугированием и удалением жидкости.
К осадку добавляют 1 мл 2 моль/л раствора натрия карбоната, перемешивают стеклянной палочкой. Осадок высушивают в сушильном шкафу при температуре 100 0C в течение 10—12 ч, а затем сжигают в муфельной печи при температуре 400—450 °С. Пробирки охлаждают, к золе добавляют 1 мл 2 моль/л раствора соляной кислоты и 5 мл бидистиллированной воды. Перемешивают стеклянной палочкой тщательно в течение 20—30 мин. Центрифугируют в течение 10 мин при 3000 мин . В опытную пробирку вносят 3 мл центрифугата, 1 мл бидистиллированной воды, 0,5 мл раствора мышьяковистого ангидрида и 1 мл 3,5 н. (1,75 моль/л) раствора серной кислоты.
В контрольную пробу вносят 3,5 мл бидистиллированной воды, 0,5 мл 2 моль/л раствора соляной кислоты, 0,5 мл раствора мышьяковистого ангидрида и 1 мл 1,75 моль/л раствора серной кислоты, сливают осторожно, обмывают ею стенки пробирок, перемешивают и ставят в ультратермостат или водяную баню при температуре 37 °С. Вместе с образцами в термостат помещают пробирку с раствором аммоний-церий-сульфата. Через 10 мин в каждую пробирку (не вынимая из термостата) с интервалом в 1 мин (по секундомеру) вносят 0,5 мл раствора аммоний-церий-сульфата и перемешивают. Фотометрируют через 12 мин (точно) на ФЭКе при синем светофильтре или на спектрофотометре при длине волны 434 нм в кювете с толщиной слоя 1 см против контроля, поочередно вынимая пробирки из термостата с интервалом в 1 мин.
Расчет результатов проводят по калибровочному графику. В 4 пробирки (№ 1, 2, 3, 4) вносят по 0,5 мл 2 моль/л раствора соляной кислоты. В пробирку № 1 добавляют 3,5 мл бидистиллированной воды, № 2 — 2,5 мл бидистиллированной воды и 1 мл калибровочного раствора D (0,02 мкг йода), № 3 — 1,5 мл бидистиллированной воды и 2 мл раствора D (0,04 мкг йода), № 4 — 0,5 мл бидистиллированной воды и 3 мл раствора D (0,06 мкг йода). Во все пробирки добавляют по 0,5 мл раствора мышьяковистого ангидрида и по 1 мл 1,75 моль/л раствора серной кислоты. Затем все операции выполняют так же, как с образцами.
Калибровочный график строят на полулогарифмической бумаге. Величину экстинкции откладывают в логарифмическом, а количество йода — в миллиметровом масштабах. Найденное по графику количество йода в мкг умножают на коэффициент 200, чтобы получить мкг%.
Примечания. 1. В комнате, где проводят анализы, не должно быть следов йода. 2. Посуда и пробирки должны быть тщательно вымыты. 3. Все реактивы должны быть химически чистыми. 4. Используют только би-
208
