Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Принцип. Цинк с дитизоном образует комплексное соединение, дающее окраску, интенсивность которой зависит от концентрации элемента.
Реактивы: основной раствор дитизона (ч. д. а.). В делительную воронку на 250 мл вносят 0,02 г дитизона и 100 мл четырех-хлористого углерода. Энергично встряхивают в течение 15 мин. Приливают 100 мл бидистиллированной воды, в которую предварительно вносят 0,5 мл 25%-ного раствора аммиака, встряхивают 2—3 мин. Удаляют слой четыреххлористого углерода. Промывают оставшийся оранжевый раствор дитизона 10 мл четыреххлористого углерода. Промывку повторяют 2 раза, сливая каждый раз четырех-хлористый углерод. В конце этой процедуры прибавляют 2,5 мл разведенной серной кислоты (1:5). Появляются черные хлопья. Перемешивают, добавляют 100 мл четыреххлористого углерода и встряхивают 1 мин. После разделения фаз раствор дитизона в че-тыреххлористом углероде сливают в чистую делительную воронку, добавляют 50 мл бидистиллированной воды и встряхивают в течение 1 мин для удаления серной кислоты. Промывку водой повторяют еще 2 раза. Раствор дитизона переливают в сухую склянку темного стекла с притертой пробкой. Хранят в холодильнике до 1 мес. Качество реактива проверяют так: в делительную воронку вносят 5 мл раствора дитизона и 25 мл 0,01 н. раствора аммиака (0,7 мл 25%-ного раствора аммиака на 1 л дистиллированной воды), встряхивают 2—3 мин. Органический слой должен быть бесцветным. Если он окрашен в бурый цвет, то раствор дитизона для анализа не пригоден;
рабочий раствор дитизона. Готовят перед анализом. В сухую мерную колбу на 100 мл вносят 6 мл основного раствора дитизона и доводят объем до метки четыреххлористым углеродом. Хорошо перемешивают;
ацетатный буферный раствор, pH 5. 272 г натрия ацетата трех-водного (х. ч.) вносят в мерную колбу на 1 л, растворяют в небольшом количестве бидистиллированной воды, прибавляют 58 мл ледяной уксусной кислоты и доводят объем бидистиллированной водой до метки. В полученный раствор добавляют 25 мл 50%-ного раствора натрия тиосульфата (натрий серноватистокислый пятиво-дный);
20%-ный раствор соляной кислоты (х. ч.); 0,3 моль/л раствор соляной кислоты;
калибровочный раствор цинка основной. В мерную колбу на 1 л вносят 100 мг металлического цинка, добавляют небольшое количество бидистиллированной воды и 10 мл 20%-ной соляной кислоты. После полного растворения цинка доводят объем бидистиллированной водой до метки. В 1 мл содержится 100 мкг цинка. При отсутствии металлического цинка можно использовать сернокислый цинк (х. ч.). С этой целью 0,4396 г реактива (ZnSO4 • 7 H2O)
14*
211
растворяют в 1 л бидистиллированной воды, предварительно подкисленной 5 мл серной кислоты. 1 мл основного раствора содержит 100 мкг цинка;
рабочий калибровочный раствор цинка. В мерную колбу на 100 мл вносят 1 мл основного калибровочного раствора и доводят до метки 0,3 моль/л раствором соляной кислоты. В 1 мл содержится 1 мкг цинка. Готовят в день проведения анализов;
очистка четыреххлористого углерода. К 500 мл реактива добавляют 10 г активированного угля, встряхивают 5 мин и фильтруют через складчатый бумажный фильтр. Очистку повторяют 2—3 раза с новой порцией угля. После этого четыреххлористый углерод перегоняют в стеклянном аппарате на шлифах. Четыреххлористый углерод марки х. ч. и ос. ч. можно использовать без очистки;
50%-ный раствор натрия тиосульфата (х. ч.). 50 г вещества растворяют в 50 мл бидистиллированной воды;
серная кислота (х. ч.), разведенная 1:5;
аммиак водный, 25%-ный раствор;
активированный уголь.
Оборудование: фотоэлектроколориметр; муфельная печь; электроплитка; перегонный аппарат стеклянный; тигли фарфоровые; делительные воронки на 250 и 500 мл; бюретки на 50 мл.
Ход определения. В фарфоровый тигель вносят 5 мл цельной крови (сыворотки, плазмы) и обугливают на электроплитке, постепенно повышая температуру до 200—250 °С. Затем пробы ставят в муфельную печь и сжигают при температуре 500—550 °С в течение 3—4 ч. Если материал полностью не сгорел, в тигель приливают 1—2 мл 50%-ной азотной кислоты, выдерживают на электроплитке, не допуская разбрызгивания раствора золы, и ставят в муфель на 1 ,ч при температуре 500 °С. При необходимости эту операцию повторяют. Тигель охлаждают. Золу смачивают 5 мл 20%-ного раствора соляной кислоты и осторожно упаривают на электроплитке досуха, не допуская разбрызгивания массы и прокаливания остатка.
В тигель приливают 2,5 мл 20%-ного раствора соляной кислоты, 5 мл дистиллированной воды и нагревают на плитке до растворения золы. Смесь охлаждают, переносят в пробирки с меткой на 25 мл (желательно с притертой пробкой) или в мерные колбы на 25 мл, смывая остатки из тигеля бидистиллированной водой, доводят объем до метки и перемешивают.
В делительную воронку или пробирку с притертой пробкой на 40—50 мл вносят 5 мл раствора золы, прибавляют 10 мл ацетатного буфера и перемешивают. Приливают из бюретки 10 мл рабочего раствора дитизона, встряхивают делительную воронку в течение 1 мин. После разделения фаз органический слой сливают в кювету с толщиной слоя 1 см и фотометрируют на ФЭКе при длине волны 538 нм (зеленый светофильтр) против контроля. При использовании пробирок верхний водный слой отсасывают при помощи во-
