Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кондрахин И.П. -> "Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики" -> 104

Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.

Кондрахин И.П., Архипов А.В., Левченко В.И., Таланов Г.А., Фролова Л.А., Новиков В.Э. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики: Справочник. Под редакцией Сайтаниди В.Н. — М.: Колос, 2004. — 520 c.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка): metodvetkllabdia2004.djvu
Предыдущая << 1 .. 98 99 100 101 102 103 < 104 > 105 106 107 108 109 110 .. 246 >> Следующая


0,1 моль/л ацетатный буфер, pH 4. В мерной колбе на 1 л растворяют 13,608 г натрия ацетата (CH3COONa • 3H2O, х. ч.), приливают 25 мл ледяной уксусной кислоты (х. ч.) и доводят объем дистиллированной водой до метки. Далее буфер фильтруют и определяют pH. Хранят при температуре 4 °С;

0,01%-ный раствор дифинилкарбазона в бензоле. 10 мг реактива переносят в мерную колбу на 100 мл, добавляют 40—50 мл бензола (х. ч.) и нагревают в стакане с горячей водой до растворения реактива. Колбу охлаждают и доводят объем бензолом до метки. Раствор хранят в темной склянке 2 нед;

основной калибровочный раствор железа (100 мкг/мл). 0,8634 г железоаммонийных квасцов f(NH4Fe(S04)2 • 12H2O, х. ч.] растворяют в 1 л бидистиллированной воды, подкисленной 5 мл концентрированной серной кислоты. Для построения калибровочной кривой готовят рабочие растворы, содержащие от 1 до 5 мкг железа в 1 мл. Пробы должны содержать от 0,5 до 20 мкг железа;

основной калибровочный раствор меди (100 мкг/мл). 0,3928 г свежеперекристаллизованной меди сульфата (CuSO4 • 5H2O) растворяют в 1 л бидистиллированной воды, подкисляют 5 мл концентрированной серной кислоты. Для построения калибровочной кривой готовят рабочий раствор, содержащий 2 мкг меди в 1 мл (2 мл основного раствора в 100 мл). Берут 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 1,0, 2,0 и 3,0 мл рабочего раствора, доводят объем до 5 мл дистиллированной водой, добавляют по 0,5 мл 0,5 моль/л хлористоводородной кислоты, 1 каплю фенолфталеина и далее поступают по ходу определения меди. Пробы содержат 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, 1,0, 2,0 или 3,0 мкг меди соответственно. При необходимости следует приготовить серию рабочих растворов, содержащих от 0,5 до 5 мкг меди.

Оборудование: фотоэлектроколориметр; тигли фарфоровые; муфельная печь; электроплитка; пробирки с притертыми пробками.

Ход определения. В фарфоровый тигель вносят 2 мл крови для определения меди или 2 мл сыворотки для определения железа, сжигают в муфельной печи при температуре 550—600 °С в течение 5—7 ч. Если озоления полностью не произошло, то тигель охлаждают, добавляют 1 мл 50%-ного раствора азотной кислоты, осторожно выпаривают на электроплитке и снова помещают в муфельную печь на 1—2 ч. В тигель приливают 5—6 мл 2 моль/л раствора хлористоводородной кислоты, доводят до кипения, а затем переносят в пробирку с меткой на 10 мл. Тигель споласкивают бидистиллированной водой, сливают содержимое в пробирку и доводят объем до метки.

219

Определение меди. 5 мл раствора золы вносят в пробирку с притертой пробкой, прибавляют 1 каплю 0,1%-ного раствора фенолфталеина, добавляют по каплям 10%-ный раствор аммиака до появления светло-розовой окраски. В случае перетитрования вносят по каплям 2 моль/л раствор соляной кислоты до получения нужной окраски. Для точного установления pH прибавляют 1 мл ацетатного буфера. Розовая окраска исчезает. Затем в пробирку вносят 5 мл (из бюретки на 50 мл) 0,01 %-ного раствора дифинилкар-базона и встряхивают в течение 1 мин. После расслоения верхний слой приобретает красную окраску, интенсивность которой пропорциональна количеству меди в пробе.

Оптическую плотность верхнего слоя измеряют на ФЭКе при длине волны 540 нм в кювете с толщиной слоя 1 см против контроля. Окраска устойчива в течение суток.

Определение железа. 2,5 мл раствора золы вносят в пробирку с меткой на 5 мл, добавляют 1 каплю 0,1%-ного раствора «-нитрофенола и нейтрализуют 10%-ным раствором аммиака до появления желтой окраски. Добавляют по каплям 0,5 н. раствор хлористоводородной кислоты до исчезновения окраски. Затем вносят 5 капель 1 %-ного раствора аскорбиновой кислоты, перемешивают и через 10 мин добавляют 5 капель 1%-ного раствора солянокислого о-фенантролина. Доводят объем бидистиллированной водой до метки, перемешивают. Измеряют на ФЭКе при длине волны 540 нм в кювете с толщиной слоя 1 см против контроля. Окраска устойчива в течение суток.

Расчет ведут по формуле

у= AV- 100 С '

где X — количество меди (или железа), мкг%; А — количество меди (или железа) по калибровочной кривой, мкг; V— объем раствора золы, мл (для меди 10 мл, для железа 5 мл); С — количество раствора, взятого на анализ, мл; 100 — коэффициент для пересчета в мкг%.

Источники: 42, 52.

Клиническое значение. Медь непосредственно участвует в гемопоэзе, катализирует включение железа в структуру гена, способствует созреванию эритроцитов, является остеогенным элементом, входит в состав медьсодержащего белка — церулоплазми-на. Она является составной частью цитохромоксидазы, тирозина-зы, уреазы и многих других ферментов. При недостатке ее развивается анемия, нарушается пигментация и кератинизация шерсти и пера, наступает дистрофия костей и суставов, снижаются продуктивность и репродуктивная функция. Такие явления сопровождаются снижением меди в крови (норму см. в приложениях 4 и 5).

Избыточное поступление меди ведет к накоплению ее в печени и почках, развивается токсикоз. В этих случаях можно обнаружить повышение концентрации меди в крови.

220

3.3.11. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ
Предыдущая << 1 .. 98 99 100 101 102 103 < 104 > 105 106 107 108 109 110 .. 246 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed