Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
заполненных неподвижной фазой бондапак Cie. Элюирование проводилось
смесью ацетонитрил/вода (2: 1), а обнаружение -• при помощи
рефрактометрического детектора (рис. 7.28). Химический анализ пяти
выделенных при этом фракций показал, что это эфиры жирных кислот и
спиртов, в углеродной цепи которых содержится от 36 до 46 атомов углерода
[126].
На такой же колонке авторы работы [127] провели разделение ряда
эфирных масел. Элюентом служила смесь метанол/вода (2:1), обнаружение
осуществлялось УФ-детектором (при 254 нм). Большинство из 20 выделенных
веществ идентифицировано не было.
Рис. 7.28. Разделение масла хохобы (Apache Jojoba) [126].
Колонки: две последовательно соединенные колонки длиной 80 см каждая;
неподвижная фаза: бондапак Cis: элюент:
ацетонитрил/aдетон (2:1); обнаружение: рефрактометрическое.
Рис. 7.29. Разделение фракций масла из Cistus ladanifer, элюируемых
пеита-ном [128].
Неподвижная фаза: лихросорб RP-18 (5 мкм); элюент; ацетонитрил/НгО (1 ;
1), градиентное элюирование до 10Cf% адетонитрила 45 мин; обнаружение:
при 220 им (отмеченные звездочкам" пики можно обнаруживать и при 240 нм).
Большинство пиков идентифицировано.
Липиды 423
Моно-, сескви- и дитерпены и лактоны сесквитерпеноидов можно разделить
за один хроматографический цикл на колонках с обращенной фазой (RP-8 или
RP-18) при градиентном элюировании смесью ацетонитрил/вода (50% -100%) в
течение 60 мин (рис. 7.29) [128, 129]. Максимумы поглощения некоторых
терпеноидов соответствуют различным длинам воли, что позволяет
осуществить их обнаружение на детекторах со сменной длиной волны (200-254
нм). Предел обнаружения составляет 5 мкг, диапазон линейности - до 20
мкг.
В работе [130] описано разделение изомеров фарнезола на колонке с
порасилом (30 см) при элюировании смесью триме-тилпентана и этилового
эфира (9:1) после предварительного обогащения пробы. Авторы работы [131]
предложили метод разделения природных восков на углеводороды, метиловые
эфиры жирных кислот, моно-, ди- и триглицериды, альдегиды и кетоны и их
количественного определения. Для разделения используются две колонки,
соединенные друг с другом (каждая длиной 20 см), заполненные сферисорбом
SSW (5 мкм). Элюирование ведется смесями различного состава на основе
гекса-на, ТГФ, изопропанола и ацетонитрила. Углеводороды элюируются
первыми (изокрэтический режим, гексан) и обнаруживаются
рефрактометрически. Остальные компоненты обнаруживают ИК-детектором по
поглощению карбонильных групп (при
5,75 мкм), так как поглощение гидроксильных групп при 3,3 мкм
незначительно. Жирные кислоты перед разделением рекомендуется переводить
в их метиловые эфиры. Достигнутый предел обнаружения равен 1,2 мкг.
К терпеноидам относятся два регулятора роста растений - абсцизовая
(АК) и гибберелловая (ГК) кислоты, поглощающие в УФ-области спектра.
Гибберелловая кислота принадлежит к группе из более чем 50 гиббереллинов,
имеющих общий гибба-новый скелет и различные заместители. Как и другие
фитогормоны, АК и ГК привлекают внимание исследователей вследствие своей
биологической активности. Содержание этих и других фитогормонов в тканях
растений крайне невелико. Например, 10 000 ячменных колеоптилей содержит
всего 1 мкг гибберелло-вой кислоты. Поэтому необходимо проводить
предварительную очистку и обогащение проб, подвергаемых разделению с
помощью ВЭЖХ. Как для очистки, так и для разделения используют колонки с
обращенными фазами [132-139, 152]. Абсцизо-вую кислоту обнаруживают по
поглощению при 254 или 280 нм, гибберелловую - в области 200-208 нм.
Гиббереллины, разделяемые на колонках с нормальной фазой, обнаруживают в
виде я-нитробензоильных эфиров при 256 нм [140, 141]. Обнаружение
гиббереллинов, меченных 3Н или 14С, проводилось при помощи
сцинтилляционного счетчика с проточной ячейкой [142, 143]. На рис. 7.30
показаны разделение абсцизовой, фазеиновой и
424 Глава 7
f, мин----
Рис. 7.30. Разделение смеси растительных гормонов (а), экстрактов из
листьев сорго (б) и трех выделенных из этого экстракта фракций (в) [152].
а, б -колонка: 25 см; неподвижная фаза: ультрасфер ODS, элюент:
Н20/СН30Н/уксус-ная кислота, градиентное элюирование от 60 : 40 : 0,5 до
30 : 70 : 0,5; объемная скорость: 1,6 мл/мин; обнаружение: прн 254 нм.
в - неподвижная фаза: ультрасфер SI; элюент:
хлороформ/ацетонитрил/уксусная кислота (94:5: 1); объемная скорость: 1
мл/мин.
1 - фазенновая кислота; 2- индолнлуксусная кислота; 3 - абсцнзовая
кислота.
индолилуксусной кислот, содержащихся в экстрактах листьев сорго, и
последующая их очистка на колонке с обращенной фазой. Предел обнаружения
составил 1 мкг, выход 75%.
Современные методы анализа растительных гормонов, включая ВЭЖХ,
рассмотрены в обзоре [153].
Литература
1. Zhukov А. V., Vereshchagin A. G. Adv. Lipid Res., 18, 247-282
(1981).
2. Stolyhwo A., Privett O. S. J. Chromatogr. Sci., 11, 20-25 (1973).
3. AitzetmHller K., Koch J. J. Chromatogr., 145, 195-202 (1978).
