Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
ная масса иость, элюировании
МОЛЬ. %
Рибонуклеаза А 13 700 21,8 1
Цнтохром с И 700 25,0 2
Лнзоцнм 14 300 26,4 3
Человеческий сывороточный альбу 66 500 28,37 4
мин
Бычий сывороточный альбумин 69 000 32,0 5
а-Лактальбумин (бычий) 14 200 32,5 6
Карбоангидраза 29 000 31,49 7
а-Гемоглобин 15 100 31,20 8
.Многлобнн 17 200 31,37 8
Эластаза 25 900 32,5 10
ji-Лактоглобулнн 18 300 34.6 10
Пролактин (овечий) 22 600 32,8 12
Человеческий плацентарный лакто- 22 100 33,7 13
геи
Гормон роста (бычий) 22 000 34,0 14
обменной хроматографией данный метод дает хорошие результаты.
При сравнении порядка элюирования белков с их гидрофоб-ностью (табл.
5.23) можно вывести общую закономерность. Возникающие аномалии следует
отнести за счет возможных конформационных эффектов.
Хорошей альтернативой обращенно-фазовой хроматографии на неподвижных
фазах на основе силакагеля с химически привитыми алкилсиланами с
короткими углеродными цепями служит высокоэффективная гель-проникающая
хроматография при условии использования материалов, устойчивых к действию
внешнего давления [93, 96-101]. Авторы работы [93] применили
высокоэффективную гель-проникающую хроматографию для очистки гор-монов
гликопротеиновой природы - фолликулостимулирующего гормона (ФСГ),
лютеипизирующего гормона (ЛГ) и человеческого хорионического
гонадотропина (ЧХГ), а также белкового гормона роста [93].
5.3.4. Гормоны поджелудочной железы
В поджелудочной железе вырабатываются два типа гормонов: клетки a-типа
продуцируют глюкагон, а биосинтез инсулина происходит в клетках p-типа.
Структуры обоих гормонов изображены на рис. 5.34.
Пептидные гормоны 339
Глюкагон
12 14 5 6 7 В 9 10 11 12 13 14 1S 16
'''18 19 7п. 21 ;2 23 24
H-His-Ser-Gh-Gly-Thr-Phe-Thr-$er-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-
Ala-Gli'-Asp-Phe-Val-Gln-
Я и 27 ?е 29 30
Trp-Leu-Met-Asn-Thr-OH
Инсулин
|- s---------s |
12 3_4 S *1 7 в 9 10 111 12 13 15 16
Г 13 19 .Э Г:
А- цепь : H-Gty-tle-Vsl-Glu-Gtn-Cys-Cys-X-Ser-Y-Cys-Ser'Leu-Tyr-GlivLeu-
Cb-Asn-Tyr-Cys-Asn-OH
S
S
*
I
1 2 3 4 5 6 i 8 9 10 11 12 П К 15
1* 17 13 f 20 21
Б"цепь : H-Phe-Val-Asn-Gln-His-Leu-Cys-Gly-Ser-his-Leu-Vat-Glu-Ala'teu-
Tyr-Leu-Vat-Cys-Gly-Glu-
22 23 24 25 /6 27 2в 30
Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr- Thr-Pro-Lys-Z-OH
А-Цепь Е-Цепъ
Иисулии X Y Z
Человеческий Thr He Thr
Свиной Thr He Ala
Бычий Ala Val Ala
Рис. 5.34. Аминокислотная последовательность глюкагона и инсулинов.
Разделению методом ВЭЖХ инсулина [7, 8, 14, 15, 43, 56, 59, 70, 71,
86, 90, 102, 104, 105] и глюкагона [8, 14, 15, 50, 56, 59, 66, 90, 103,
106] посвящено очень большое число работ (экспериментальные условия см. в
табл. 5.24).
Обращенно-фазовая хроматография - один из наиболее распространенных
методов быстрого определения степени чистоты инсулина. Метод позволяет
регистрировать примеси в большинстве коммерчески доступных образцов [70].
Несмотря на то что человеческий инсулин отличается от свиного всего на
один аминокислотный остаток в положении В30, а свиной инсулин в свою
очередь отличается от бычьего на два аминокислотных остатка, эти три
гормона можно легко отделить один от другого (рис. 5.35).
Порядок элюирования структурно близких инсулинов определяется
гидрофобностью входящих в их состав аминокислотных остатков. Однако
конформационные эффекты могут привести к нарушению порядка элюирования.
Тип и концентрация органического модификатора подвижной фазы, а также ее
ионная сила оказывают существенное влияние на характер разделения
инсулинов методом ВЭЖХ.
Разделение бычьего и свиного инсулинов на колонке с нуклеосилом 10
Ci8 (250X4,6 мм внутр. диаметр) возможно только при добавлении сульфата
натрия (0,1 моль/л) в подвижную фазу (метанол/ацетонитрил/0,01 М
фосфатный буфер
22*
Таблица 5.24. Условия разделения методом ВЭЖХ инсулииов и глюкагоиЗ
