Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
порциях по 10 мкл.
1 - АКТГ17_24 и АКТГ3_20; 2-АКТГ9_24; 3-АКТГ,_20, АКТГ2_20 и АКТГ3_20; 4
-
АКТГ,_15; 5 - АКТГ[_24-сульфоксид; 6 - AKTTj-j*.
тидаз. Эти результаты имеют огромное значение в свете использования
биологически активных пептидов в медицине [8].
В работе [61] описаны успешное выделение методом ВЭЖХ и идентификация
методом радиоиммуноанализа С-концевых фрагментов АКТГ из средней доли
гипофиза крыс. Разделение авторы этой работы проводили на колонке
размером 300x3,9 мм (внутр. диаметр), заполненной ц-бондапаком С^.
5.3.3.2. Лютеинизирующий гормон (ЛГ), фолликулостимулирующий
гормон (ФСГ), пролактин, гормон роста (ГР) и ли-потропин (ЛПГ). В
настоящее время число публикаций, посвященных разделению
аденогипофизарных гормонов белковой природы относительно мало [14, 56,
61, 88, 93-95]. Структуры этих гормонов приведены в табл. 5.15, а
экспериментальные условия их разделения методом ВЭЖХ - в табл. 5.20.
Вплоть до настоящего времени в этих целях использовались две различные
методики ВЭЖХ: обращепно-фазовая [14, 56, 61, 88, 89,
Таблица 5.20. Условия разделения методом ВЭЖХ аденогипофизарных гормонов
белкового происхождения
Неподвижная фаза
Элюент
Колонка,
мм
Обнаружение (нм)
Время удерживания, мин
Лютеинизирующий гормон [93]
Гель TSK-3000 SW
Гель TSK-3000 SW
Лихросорб RP-2 (от 5 до 7 мкм)
Ультрасфер SAC (от 4 до 6 мкм)
Сферисорб S5T6 (от
3 до 7 мкм)
Лихросорб RP-8 (от
4 до 7 мкм)
Лихросорб RP-2 (от 5 до 7 мкм)
Ультрасфер SAC (от 4 до 6 мкм)
0,1 М иатрий-ацетатный (0,5 мл/мин)
буфер (pH 7,0) I 7,5X3001 УФ (216)
0,1 М натрий-ацетагный (0,5 мл/мин)
Фолликулостимулирующий гормон [93]
буфер (pH 7,0) I 7,5x3001 УФ (216)
Пролактин крысиный [94]
А: 0,155 М HCI), Б: А до 75% А: 0,155 М НС1), Б: А до 75% А: 0,155 М
НС1), Б: А до 75% А: 0,155 М НС1), Б: А до 75%
хлорид натрия (pH 2,1, ацетонитрил, линейный Б за 90 мин (1 мл/мии)
хлорид натрия (pH 2,1, ацетонитрил, линейный Б за 90 мин (1 мл/мин)
хлорид натрия (pH 2,1, ацетонитрил, линейный Б за 90 мин (1 мл/мии)
хлорид натрия (pH 2,1, ацетонитрил, линейный Б за 90 мин (1 мл/мин)
установлено градиент от
установлено градиент от
установлено градиент от
установлено градиент от
Пролактин овечий [94]
А: 0,155 М хлорид натрия (pH 2,1, установлено НС1); Б: ацетонитрил,
линейный градиент от А до 75% Б за 90 мин (1 мл/мин)
А: 0,155 А1 хлорид натрия (pH 2,1, установлено HCI); Б: ацетонитрил,
линейный градиент от А до 75% Б за 90 мин (1 мл/мин)
5 ' 150
5х 150 5 150 5x150
3X150
3x150
УФ (215 или 280) или
флуоресценция (225/340 или 280/370) УФ (215 или 280) или
юлч-оресценция (225/340 или 280/370) УФ (215 или 280) или
флуоресценция (225/340 или 280/370) УФ (215 или 280) или
флуоресценция (225/340 или 280/370)
УФ (215 или 280) или флуоресценция (225/340 или 280/370) УФ (215 или
280) или флуоресценция (225/340 или 280/370)
17,3 (отн. лизоцима)
25.0 (отн. лизоцима)
20.0 (отн. лизоцима)
29.1 (оти. лизоцима)
13,1 (отн. лизоцима',
16,7 (отн. лизоцима'
Сферисорб S5C6 (от 3 до 7 мкм)
Лихросорб RP-8 (от 4 до 7 мкм)
Гель TSK-2000 SW Гель TSK-3000 SW
Лихросорб RP-2 (от 5 до 7 мкм)
Ультрасфер SAC (от 4 до 6 мкм)
Лихросорб RP-8 (от 4 до 7 мкм)
Гиперсил-ODS (5 мкм)
(д,-Бопдапак Ci8
(10 мкм)
А: 0,155 М хлорид натрия (pH 2,1, установлено ЗХ 150 УФ (215 или 280)
или 16.6 (отн.
HC1), Б: ацетонитрил, линейный градиент от 3 150 флуоресценция
лизоцима)
А до 75% Б за 90 мин (1 мл/мин) (225/340 или
280/370) 16.6 (отн.
А: 0,155 М хлорид натрия (pH 2,1, установлен.) УФ (215 или 280)
или лизоцима)
HC1), Б: ацетонитрил, линейный градиент ог флуоресценция
А до 75% Б за 90 мии (1 мл/мии) (225/340 или
280/370)
Гормон роста человеческий [93|
0,1 М натрий-фофсфатный буфер (pH 7,0) 7,5x300 УФ (210)
---
(0,5 мл/мин) 7,5 .300 УФ (216)
0,1 М натрий-фосфатный буфер (pH 7,0)
(0,5 мл/мин)
Гормон роста бычий [94]
А: 0,155 М хлорид натрия (pH 2,1, установлено 5X150 УФ (215 или 280)
