Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
64, 71], гормонов типа кальдитонина [52, 71, 89, 108, 109], гормона
паращитовидной железы [110], секретина [111], пептидов с предполагаемым
гор-
Пептидные гормоны 345
Таблица 5.26. Объемы элюирования Ve, значения k н молекулярные массы
образцов, разделенных на колонке (600X7,5 мм) с гель-TSK 2000 SW (104=2
мкм) при элюировании 0,05 М натрий-фосфатиым буфером (pH 7,2) с 0,3%
додецилсульфата натрия с объемной скоростью 0,3 мл/мин; обнаружение
проводилось по поглощению в УФ-области при 280 нм [59]
Проба V,. мл k Молекуляр
ная масса
Ферритин (Vo) 12,6 0 480 Г00
Овальбумин 12,6 0 45 000
а-Химотрипсиноген А 13,2 0,058 25 700
Цитохром с 14,5 0,183 12 400
Апротинин 14,5 0,183 6520
Инсулин (свиной) 14,6 0,192 5782
Глюкагон 14,8 0,211 3485
Тетракосактид 14,8 0,211 2934
а-Эндорфнн 15,9 0,317 1746
Нейротензин 15,0 0,231 1673
а-Мелаиоцитостимулирующий гормон 15,2 0,250 1665
Соматостатин 15,4 0,270 1638
Вещество Р 15,1 0,240 1348
Лютеинизирующего гормона рили- 14,9 0,221 1182
зинг-фактор
Брадикинин 15,2 0,250 1060
Ангиотензин I 15,0 0,231 1297
Аигиотеизин II 15,8 0,308 1046
Ангиотензин III 15,6 0,288 931
Окситоцин 15,0 0,250 1007
Вазопрессин 15,2 0,250 1056
Arg-вазотоцин 15,3 0,260 1022
З-Казоморфнн 17,5 0,471 790
Р-Казоморфин (1---5) 19,0 0,615 580
Тнмопоэтинактнвный фрагмент (32--- 16,8 0,404 680
20,2 0,731 574
Leu-эикефалнн 19,0 0,615 556
Тафцин 16,4 0,365 501
Аргинин 21,0 0,808 174
Аланин 23,0 1,000 89
Другие аминокислоты >22,8 - ---
мональным действием типа пептида, вызывающего сон [52], таф-цина [15,
112] или тироимитирующих иодированных аминокислот [113-117].
В последовательном синтезе секретина и его аналогов ОФ-ВЭЖХ
(лихросорб RP-18, 10 мкм, 300X4 мм) служила прекрасным методом очистки
конечного целевого продукта и всех промежуточных соединений [111].
Изучение возможности использования ВЭЖХ на неподвижных фазах на
основе силикагеля, модифицированного алкил-сил аном (гиперсил ODS), для
разделения петидов и белков с
346 Глава 5
молекулярной массой до 65 000 с сохранением их биологической активности
привело к весьма впечатляющим результатам (рис. 5.36 и 5.37) [14].
Более или менее эффективное разделение пептидов и белков в большом
диапазоне молекулярной массы можно проводить методом гель-проникающей
хроматографии в присутствии додецилсульфата натрия на колонках с недавно
разработанным носителем гель TSK 2000 SW (табл. 5.26) [59].
Порядок элюирования соединений с молекулярной массой вплоть до 50 000
соответствует размерам молекул пробы. Таким образом, молекулярную массу
белков и пептидов в диапазоне 1000-45 000 можно определять исходя из
объема элюирования.
Литература
1. Molnar /., Horvath С., in Goodman М., Meienhofer J. (Eds.):
Peptides, p. 48, Halsted, New York, 1977.
2. Frei R. W" Michel L" Santi W. J. Chromatogr., 126, 665 (1976).
3. Krummen K, Frei R. W. J. Chromatogr., 132, 27 (1977).
4. Rivier J. E. J. Liq. Chromatogr., 1, 343 (1978).
5. Voelter W., Echner H. неопубликованные данные.
6. Molnar I., Horvath C. J. Chromatogr., 142, 623 (1977).
7. Gabriel T. F., Michialewski J. ?., Meinhofer J., in: Gross
E., Mienhofer J.
(Eds.): Peptides, Structure and Biological Function, p. 105.
Pierce Chemical
Company, Rockford, Ii, 1979.
8. Bennet H. P. J., Hudson A. М., McMartin C., Purdon G. E. Biochem.
J., 168, 9 (1977),
9. Kronbach Т., Voelier W. неопубликованные данные.
10. Lundanes E., Greibrokk T. J. Chromatogr., 149, 241 (1978).
11. Lindeberg G. J. Chromatogr., 193, 427 (1980).
12. Schrode J., Folk J. E. J. Biol. Chem., 253, 4837 (1978).
13. Majors R. E. Analysis, 10, 549 (1974).
14. O'Hare M. J., Nice E. C. J. Chromatogr., 171, 209 (1979).
15. Meek J. L. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77, 1632 (1980).
16. Gribnau Т. C. J., Visser J., Nirard R. J. F. Affinity Chromatography
and Related Techniques, Elsevier Scientific Publishing Company Amsterdam,
