Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
крьк'ниый PRL-B-2; 12 - гормон роста бычий GH-B-18.
94, 95] и гель-пропикающая хроматография [93]. В фундаментальной работе
Найса и др. [94] показано, что белки можно успешно разделять на
неподвижных фазах на основе силикагеля, модифицированного алкилсиланами с
короткими углеродными цепями. В табл. 5.21 приведены характеристики ряда
неподвижных фаз такого типа.
Время удерживания различных белков, в том числе пролак-тина (крысиного
и овечьего) и гормона роста, на колонках с неподвижной фазой на основе
силикагеля, модифицированного алкилсиланами с короткими углеродными
цепями, указано в табл. 5.22. Эффективность разделения белков на таких
неподвижных фазах демонстрирует рис. 5.33. Хотя многие белки слишком
гидрофобны и не разделяются в указанных условиях (табл. 5.22, рис. 5.33),
в сочетании с гель-проникающей и ионо-
Таблица 5.21. Характеристики неподвижных фаз на основе силикагеля,
модифицированного алкилсиланами с короткими углеродными цепями,
используемых для разделения белков методом ВЭЖХ [94]
Неподвижная фаза Длина угле Размер ча Диаметр Объем пор, Удельная
Форма частиц
родной цепи стиц, мкм пор, ИМ мл/t- поверхность,
м2/г
Лихросорб RP-2 1 От 5 до 7 - --- 500
Произвольная
Ультрасфер SAC 3 От 4 до 6 8 0,57 180
Сферическая
Сферисорб S5C6 6 От 3 до 7 8 0,57 200
Сферическая
Лихросорб RP-8 8 От 4 до 7 -- -- >250
Произвольная
Таблица 5.22. Относительное время удерживания белков (лизоцим = 0),
определенное методом ВЭЖХ [94]
Колонки: 150X5 мм (внутр. диаметр); неподвижные фазы, модифицированные
алкилсиланами с короткими углеродными цепями: указаны в табли це; элюент:
А- 0,155 М раствор NaCl (pH 2,1, установлено НС1), Б - ацетонитрил,
линейный градиент от 0 до 75% Б в течение 90 мни; объемная скорость: 1
мл/мин; обнаружение: по поглощению в УФ*области (при 215 нм)
Белок Молекуляр- 1
Лихросорб Ультрасфер Сфеоисорб Лихросорб
иая масса / RP-2
SAC S5C6 RP-8
Рибонуклеаза А (поджелудочная железа быка, типа IIIA) 14 200 ---
10,2 --- 10,7 ---11,3 ---12,0
Фактор роста эпидермиса (мышиный) 6 000 ---
---7,6 ---8,0 ---
Кальцитонин (синтетический, человеческий) 3 400 -4,1
---4,4 -4,1 ---5,0
Цитохром с (из сердца лошади, тип III) 11 700 ---
2,5 ---3,1 -2,3 -3,8
Гормон паращитовидной железы (бычий) 9 500 ---
2,4 ---2,3 ---2,1 -2,6
Лизоцим (из яичного белка) 14 300 0
0 0 0
Бычий сывороточный альбумин (фракция V) 68 000 3,2
3,3 5,8 7,2
Человеческий сывороточный альбумин 66 500 3,8
3,5 --- ---
а-Лактальбумин (бычий) 14 200 4,6
7,4 6,6 7,2
а-Лактальбумин (крысиный) 14 200 4,9
--- 7,9
Миоглобин 17200 7,1
9,0 9,5 8,9
а-Гемоглобин (бычий) 15 100 8,2
9,2 9,6 11,3
Карбоангидраза (из эритроцитов быка) 29 000 9,8
9,5 9,6 10,0
ji-Л актоглобулии А (коровье молоко) 18 300 10,1
10,0 --- 8,8
(}-Лактоглобулин В (коровье молоко) 18 300 10,1
10,0 --- 8,8
Эластаза (поджелудочная железа свиньи, тип IIIA) 25 900 11,1
10,0 11,7 ---
Пролактин (овечий P-S-13) 22 600 13,1
16,7 16,6 16,6
Человеческий плацентарный лактоген 22 100 14,3
20,2 17,6 18,5
Пролактин (крысиный PRL-B-2) 22 600 17,3
25,0 20,0 29,1
Гормон роста (бычий GH-B-18) 22 000 17,3
29,0 39,4
.338 Глава 5
Таблица 5.23. Корреляция между порядком элюирования белков и их
гндрофобностью при разделении методов ВЭЖХ [94]
Неподвижная фаза: силикагель, модифицированный алкилсиланами с
короткой угле
родной цепью; прочие условия разделения см. в подписи к рис. 5.33;
гидрофобное! (моль. %) рассчитана с учетом Тгр, Phe, Leu, Не, Туг, Val и
Met
Белок Молекуляр Гндрофоб- Порядок
