Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Хеншен А. -> "Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии" -> 134

Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.

Хеншен А. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии — М.: Мир, 1988. — 688 c.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка): visokoeffektivnayajidkostnayahromatograf1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 128 129 130 131 132 133 < 134 > 135 136 137 138 139 140 .. 296 >> Следующая

2,2 (35:65), 2 - изопропа-
нол/ацетонитрил (33,3 : 66,7)/ 0,1 М фосфатный буфер, pH 2,2 (4 : 6).
Таблица 5.19. Рассчитанные и экспериментально найденные коэффициенты
емкости производных АКТГ [86]
Колонка: 250X4,6 мм (внутр. диаметр); неподвижная фаза: нуклеосил 10
Cia; элюент 1: ацетоинтрнл/метанол (16,7: 83.3)/0,1 М сульфат натрия в
0,01 М фосфа тном буфере (pH 2,2) (35:65), элюеит 11: изопропанол/метанол
(16,7:83,3), 0,1 М перхлорат натрия в 0,01 М фосфатном буфере (pH 2,2)
(35 : 65); объемная скорость 1 мл/мин; обнаруже-ние: по поглощению в УФ-
областн (при 215 нм); мертвое время колонки принято равным
2 мин
Соединение Число ами Арасч <РН 2'Ч *эксп
нокислотных
остатков элюеит I элюент II
актг15.32 18 2,15 1,5 0
АКТГ [.J2 32 13,8 7,5 4,7
актг,_14 14 20,15 10,1 9,1
актг,_24 24 26,25 13,9 17,7
актг,_28 28 20,8 10,6 10,0
Пептидные гормоны
1
329
О
5 Ю t, мин
Рис. 5.30. Разделение (Gly1)-AKTFi_ie-NH2 (1) и его сульфокси-да (2)
методом ВЭЖХ [70]. Условия разделения см. в подписи к рис. 5.29.
Соотношение элюентов А : В равно 16 : 9.
t, мин
Рис. 5.29. Разделение свиного (1) и человеческого (2) АКТГ методом ВЭЖХ
[70].
Колонка: 200X4 мм (виутр. диаметр); неподвижная фаза: нуклеосил 5 Си;
элюент: Л -
0,005 М тартратный буфер (pH 3,0)+0,005 М 1-бутансульфонат натрия+0,05 М
сульфат иат-рня, Б - ацетоиитрил/0,005 М тартратный буфер (pH 3,0)+0,01 М
1-бутансульфонат нат-рня+0,1 М сульфат натрия (1 : I), 2 : 3 (А : Б);
Объемная скорость: 1 мл/мин; обнаружение;
по поглощению при 220 им.
щи ОФ-ВЭЖХ еще раз подтверждает высокую значимость этого метода в
исследованиях пептидов [70].
В условиях, аналогичных приведенным па рис. 5.29 (содержание
ацетонитрила в подвижной фазе соответственно 18 и 16%), наблюдалось
хорошее разделение пяти производных AKTT^js, отличающихся друг от друга
всего на один аминокислотный остаток: ([3-Ala10)-AKTT^ig-Nhb,
AKTTi-is-NI-b,
(L-Ala>°)-AKTrV18-NH2, (D-AlaI0)-AKTri_18-NH2 и (Aib40)-АКТГ,-i8-NH2
[70].
В процессе синтеза или выделения АКТГ остаток метионина в положении 4
может быть окислен до соответствующего суль-фоксида. Для исследователей,
занимающихся изучением пептидов, очень важна возможность разделения
окисленных и восста-
330 Глава 5
Рис. 5.31. Хроматограмма а-МСГ, очищенного традиционными методами [6].
Колонка: 250X4,6 мм (внутр. диаметр); неподвижная фаза: лихросорб RP-
8.
5 мкм; элюент: Л -0,1 М фосфагны буфер (pH 2,1). /> -ацетонитрил (от 0
до 100%); объемная скорость: 2 мл/мии: обнаружение: по поглощению
прн
200 нм.
10 15 20
t, мин
новленных форм метионинсодержащих пептидов. Наиболее полно этим
требованиям отвечает ВЭЖХ, и примером тому может служить хроматограмма,
полученная при разделении (Gly1)-AKTri_i8-NH2 и соответствующего
сульфоксида (рис. 5.30). Точно так же хроматограмма (рис. 5.31),
полученная при разделении образца а-МСГ, очищенного традиционными
методами, должна убедить каждого исследователя пептидов в том, что в
настоящее время не существует лучшего метода контроля чистоты пептидов,
чем высокоэффективная жидкостная хроматография. Природа отдельных пиков
(рис. 5.31) "чистого" образца а-МСГ не установлена. Это могут быть
различные конформеры, пептиды с различной последовательностью или
производные, содержащие сульфоксид метионина.
ВЭЖХ все шире используется для выделения природных пептидов, таких,
как АКТГ, и их производных из биологического материалов. Как установлено,
через 2 мин после внутривенного введения крысам АКТГ|_24, меченного 3Н по
аминокислотным остаткам 2, 7 и 23, основные продукты, циркулирующие в
крови, - это исходный пептид и соответствующий сульфоксид. Меньшие
количества АКТГ17_24) АКТГ18_24, АКТГ9_24, АКТП-го, АКТГ2_20, АКТГ3_2о и
АКТГ1_|5 образуются под действием пеп-
Пептидные гормоны 331
Номер фракции
Рис. 5.32. Разделение 3Н-меченых пептидов плазмы крыс методом ВЭЖХ [8].
Подготовка пробы. Плазма взята у десяти крыс через 2 мин после введения
^-меченого AKTTi-24* Экстракты плазмы были приготовлены путем
депротеннизации плазмы равным объемом 30%-ной трифторуксусной кислоты и
очисткой надосадочной жидкости пропусканием через колонку с 0,5 мл
октадекаснлилсфернсорба (10 мкм); элюент: 3X0,5 мл 1%-ной трифторуксусной
кислоты н 0,5 мл смееи метанол/вода/трифторуксусная кислота (80 : 19 :
1).
Условия разделения ВЭЖХ. Колонка: 250X4 мм (внутр. диаметр); неподвижная
фаза: партисил ODS, 10 мкм; элюент: метанол/вода/трифторуксусная кислота,
линейное градиентное элюирование смесн от 20:79:1 до 55:44:1; объемная
скорость: 0,7 мл/мин; обнаружение: по радиоактивности (условная шкала) в
Предыдущая << 1 .. 128 129 130 131 132 133 < 134 > 135 136 137 138 139 140 .. 296 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed