Жидкостная хроматография при высоких давлениях - Энгельгардт Х.
Скачать (прямая ссылка):
Градиентное элюирование незаменимо при разделении смесей соединений, полярности которых значительно различаются. Необходимость в градиентном элюировании возникает при разделении таких смесей методом адсорбционной хроматографии на полярных и неполярных неподвижных фазах и методом ионообменной хроматографии (см. гл. VIII, разд. Г.5). Используя градиентное элюирование в адсорбционной хроматографии, можно в процессе одного анализа разделить смеси компонентов, значения к' которых различаются в 104 и более раз. Чтобы можно было реализовать это огромное преимущество в рутинных анализах, надо решить ряд задач и, в частности, уменьшить вероятность ошибочной интерпретации хроматограмм, полученных при градиентном элюировании. При соблюдении определенных мер предосторожности, например проведении холостого градиентного элюирования в идентичных условиях перед
Адсорбционная хроматография
151
97:3
CH3CN:H20 67; 35 74-26 ggjggl
Объем элюирования, мл
Рис. VI. 19. Градиентное элюирование фенациловых эфиров жирных кислот
[58].
Колонка: 90 см х 6,4 мм (внутр.); неподвижная фаза: ц-бондапак С-18 (Waters Associates). Элюент: смесь ацетоннтрнл - вода; F = 2 мл/мин; и = 1 мм/с.
Проба: насыщенные и ненасыщенные жирные кислоты от лауриновой (/) до лигноцернновой (24) кислоты. Ненасыщенные кислоты всегда элюируются перед насыщенными кислотами, содержащими такое же число углеродных атомов.
или после соответствующих анализов, осуществить градиентное элюирование достаточно просто.
Устройства дня градиентного элюирования в жидкостной хроматографии при высоких давлениях (смешение при высоких давлениях) стоят очень дорого, и многие хроматографисты ими не располагают. В таких случаях градиентное смешение можно проводить перед насосом (в области низкого давления) [56]. Можно также менять состав элюентов ступенчато, просто заменяя сосуд с элюентов. Если набор таких сосудов достаточно велик и концентрации элюентов меняются постепенно, то фактически будет проводиться элюирование с непрерывным градиентом. На рис. VI.19 показана хроматограмма, полученная при таком ступенчатом изменении элюирующей силы смеси растворителей [58]. Из-за низкой скорости элюирования (0,1 см/с) разделение фенациловых эфиров жирных кислот длится более 4 ч.
IV. ВОЗМОЖНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ АДСОРБЦИОННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Интерес к жидкостной хроматографии при высоких давлениях в последнее время все больше и больше растет. Уже появились первые монографии и обзорные статьи о применении жидкостной хроматографии при высоком давлении в клинической медицине [59], в фармацевтической промышленности [60], при последовательном
152
Глава VI
анализе пептидов и протеинов [61] ив судебной медицине [62]. Если бы мы стали обсуждать все опубликованные за это время примеры разделений, то объем книги чрезмерно возрос бы, поэтому мы предт почли ограничиться лишь примерами разделений, поэтому системы, приведенные в данной главе, выбраны произвольно. Разделение же отдельных классов соединений рассматривается в ряде статей и монографий [63 — 65]. Определенный интерес представляют также более старые монографии по колоночной хроматографии [66, 67], так как от систем классической колоночной хроматографии относительно просто перейти к жидкостной хроматографии при высоких давлениях. В этом разделе мы рассмотрим несколько примеров разделения, демонстрирующих возможности различных разделительных систем.
А. Полярная неподвижная фаза
Для жидкостной хроматографии при высоком давлении на полярных твердых фазах справедливы те же закономерности, которые установлены для классической колоночной хроматографии («адсорбционная хроматография»). Применяется жидкостная хроматография при высоком давлении главным образом для разделения неполярных соединений и соединений со средней полярностью. Сильнополярные и ионогенные соединения удерживаются на полярных адсорбентах слишком сильно, и для их разделения применяют другие системы (распределительная или ионообменная хроматография) предпочтительно с неполярными неподвижными фазами.
Разделение ароматических многоядерных углеводородов выполняют на силикагеле, окиси алюминия, пористых телах и поверхност-но-пористых материалах (см. рис. VI.4) [17, 68-72]. Чтобы повысить селективность, на адсорбент наносят комплексо образо вате ли, например нитрат серебра, тринитрофлуоренон [10, 11]. На силикагеле, покрытом нитратом серебра, можно иногда разделить цис-и транс-изомеры олефинацетатов (от С10 до С18) [73], добавляя ком-плексообразователь (нитрат серебра) к элюенту [74]. Разделительная способность жидкостной хроматографии при высоких давлениях в этой области продемонстрирована на примере разделения 13 ароматических углеводородов, проведенного за 60 с (рис. VI.20).
Это разделение также показало, что, заполняя частицами очень малого диаметра (dp к 5 мкм) относительно короткую колонку (6,5 см), можно получить достаточное число теоретических тарелок (п ^ ^ 3000) и, следовательно, проводить на таких колонках сложные разделения. Поскольку длина колонки невелика, необходимый перепад давления, несмотря на малый размер частиц, составляет всего 72 атм.
