Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Химия -> Энгельгардт Х. -> "Жидкостная хроматография при высоких давлениях " -> 57

Жидкостная хроматография при высоких давлениях - Энгельгардт Х.

Энгельгардт Х. Жидкостная хроматография при высоких давлениях — М.: Мир, 1980. — 250 c.
Скачать (прямая ссылка): jidkostnayahromatografiya1980.djvu
Предыдущая << 1 .. 51 52 53 54 55 56 < 57 > 58 59 60 61 62 63 .. 94 >> Следующая

Колонка: 30 см х 4,2 мм (внутр.); неподвижная фаза: силикагель Si 100, d, я 10 мкм; F ¦ 2 мл/мин; УФ-детектор, 254 нм; объем пробы: 0,5 мкл. Градиенты приготовлены при низком давлении. Объем камеры смешения 10 см3. Программа элюирования: 1) 5 мин изо кратное элюирование «-гептаном; 2) градиентное элюирование с переходом к хлористому метилену; 3) то же с переходом к смеси хлористый метилен - изопропанол (10%); 4) то же с переходом к смесн хлористый метилен — нзопро-панол 1:1. Регенерируют колонку, промывая ее перед вводом пробы а) 15 мин хлористым метиленом, б) 15 мин «-гептаном (Uvasol, Merck).
объем каждой ступени градиентного элюирования должен составлять по меньшей мере 2,5 колоночных объема. Согласно другим сведениям, эти значения должны быть намного больше. Для проведения полного градиентного элюирования с привлечением всего набора компонентов - от неполярных до сильнополярных — требуется примерно 250 колоночных объемов. При’этом без остатка элюируются как неполярные, так и полярные соединения.
В приборе для жидкостной хроматографии при высоком давлении с аналитической колонкой 30 см х 4 мм (внутр.) элюирование с градиентом от 0 до 100% компонента Б должно продолжаться не менее 20 мин при скорости элюента 2 мл/мин. Чем короче период градиентного элюирования, тем меньше компонентов удается отделить друг от друга в процессе элюирования. Если при постоянном времени градиентного элюирования увеличивают скорость потока, то объем удерживания, при котором вымывается пик, увеличивается. Однако из-за более высокой скорости увеличивается также ширина полос, так что улучшить разделение не удается.
При градиентном элюировании особые требования предъявляются к чистоте элюентов. Нарример, рекомендуется очистка элюентов путем адсорбционной фильтрации через активную окись алюминия
Адсорбционная хроматография
149
Рис. VI. 18. Многоступенчатое градиентное элюирование. Холостое градиентное элюирование, проведенное при тех же условйях, что на рис. VI. 17, но без введения пробы и изократиого начального промывания (примеси из
элюента!).
или силикагель (см. рис. XII. 1). Скопившиеся в разделительной колонке загрязнения вымываются из нее при градиентном элюировании в виде острых пиков, которые можно принять за пики компонентов смеси. Поэтому перед анализом целесообразно провести градиентное промывание колонки с тем, чтобы определить наличие пиков, обусловленных загрязнением. Пример такого «холостого» элюирования показан на рис. VI.18. Эта хроматограмма получена в тех же условиях, что и приведенная на рис. VI. 17, только проба в первом случае не вводилась. Степень обогащения многими примесями может быть чрезвычайно высокой, поэтому длительность регенерирования или объемы, расходуемые на промывание при регенерировании, должны быть постоянными. Кроме того, рекомендуется до или после разделения проводить градиентное элюирование при идентичных условиях без добавления пробы. Такое обогащение примесями наблюдается как для полярных, так и для неполярных неподвижных фаз. Концентрируются примеси не только исходного, т. е. наиболее слабого элюента градиентной смеси, но и примеси наиболее сильного элюента, для элюирования которых элюирующая сила градиентной смеси еще недостаточна. Это означает, что для градиентного элюирования можно использовать только растворители с высокой степенью очистки (ч. д. а. или «для анализа остатков»). Все это удорожает анализ, так как после разделения элюенты получают в виде смеси.
150
Глава VI
Регенерирование разделительной колонки, т. е. переход в исходное состояние путем удаления полярных компонентов элюента, занимает довольно много времени, особенно если это колонка с полярной неподвижной фазой. При этом вымыть остатки полярных растворителей намного проще, чем добиться установления равновесия между поглощенной адсорбентом и растворенной в элюенте водой [56]. Чтобы проверить, восстановлены ли в системе исходные условия, повторно определяют величину к' для пробы. Для регенерирования разделительной колонки и восстановления исходных условий требуется по меньшей мере 10—30 колоночных объемов элюента. Таким образом, регенерация колонки занимает больше времени, чем само разделение методом градиентного элюирования. Поэтому часто имеет смысл не приводить колонку опять к исходным условиям (равновесие с неполярным элюентом), а стандартизовать также время регенерирования, поскольку это все равно необходимо делать из-за примесей в элюенте. Время регенерирования можно также значительно сократить путем обращения градиентов [56, 57].
Регенерирование колонок, заполненных неполярными или другими химически связанными фазами, связано с меньшими трудностями. Равновесие вновь устанавливается после промывания уже пятью колоночными объемами. Все же следует и здесь стандартизовать время регенерации, так как на неполярных фазах могут концентрироваться примеси из воды и (или) метанола.
Для регенерирования разделительной колонки при ступенчатом градиентном элюировании, т, е. для возвращения разделительной колонки от воды к к-гептану, необходимо использовать ряд из трех или пяти растворителей для того, чтобы избежать эффекта расслоения. Скотт [53] предлагает следующий ряд элюентов: этанол, ацетон, этилацетат, 1,2-дихлорэтан, гептан. Объем каждого из этих элюентов должен более чем в шесть раз превышать мертвый объем колонки. Разумеется, регенерирование для экономии времени можно проводить при более высоких скоростях, чем разделение.
Предыдущая << 1 .. 51 52 53 54 55 56 < 57 > 58 59 60 61 62 63 .. 94 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed