Жидкостная хроматография при высоких давлениях - Энгельгардт Х.
Скачать (прямая ссылка):
Описано также разделение методом жидкостной хроматографии при высоких давлениях пестицидов [50, 75], полихлорбифенилов [76,
Адсорбционная хроматография
153
?,С
Рис. VI.20. Разделение многоядерных ароматических соединений.
Колонка: 6,5 см х 4 мм (внутр.); неподвижная фаза: лихросфер (Merck); элюент: н-пеитан; Др = 72 атм;
и = 9,3 мм/с.
Проба *. 1 - инертное вещество; 2 - растворитель; 3 - бензол; 4 — нафталин; 5 - дифеинл; 6 - антрацен; 7 —пиреи; 8 — флуорантен; 9 — о-терфенил; 10 — 1,2-бензантрацен; 11 — 3,4-бензпирен; 12 — перилен; /3 — 1,12-бензперилен; 14 — коронен; 15— 1, 2, 5, 6-дибензантрацен.
77], гербицидов [78] (см. ис. VI. 11). Разумеется, чувствительность обнаружения при этом ниже, чем при разделении методом газовой хроматографии с использованием оелективных детекторов, но методом жидкостной хроматографии разделяют сами вещества, а не специально полученные их производные, что значительно упрощает анализ.
Сначала главной областью применения жидкостной хроматографии при высоком давлении был анализ фармацевтических и лекарственных препаратов [79-81], стероидов [82, 83], сердечных ядов [84, 85], алкалоидов [86], а также афлатоксинов [87]. Этим же методом проведено разделение диасгереомеров. Чтобы повысить разделительную способность, Наканиши и сотр. [88] (они использовали силикагель с размером частиц примерно 40 мкм) несколько раз прокачивали смесь через одну и ту же разделительную колонку.
Уже на колонке длиной 30 см, если она заполнена силикагелем с малым размером частиц (4 — 8 мкм), можно провести разделение
154
Глава VI
Инертное
вещество
Рис. VI.21. Разделение диастерео-меров а-фенилэтиламид о-ме-тилоксифенилуксусной (миндальной) кислоты.
Колонка: 30 см х 3 мм (внутр.); неподвнж-кая фаза: сферосил ХОА 400; элюент*. нзо-октан — хлороформ (2 :1, по объему); F ¦ * 1,4 мл/мин; Ар = 135 атм.
пары диастереомеров (рис. VI.21) [89, 90]. На полярной неподвижной фазе можно также разделить порфирин и производные хлорофилла (метиловый эфир) [91, 92].
Однако следует заметить, что многие разделения можно осуществить и на других неподвижных фазах («обращенная фаза») и с другими разделительными системами (распределительная хроматография). Выбор системы зависит не только от того, какие вещества анализируются, но и от того, работал ли уже хроматографист с данной разделительной системой.
Б. Неполярная неподвижная фаза
В настоящее время в жидкостной хроматографии при высоком давлении чаще всего применяются системы с обращенной фазой. Примерно 60-80% всех аналитических разделений проводят этим методом. В большинстве случаев неподвижной фазой служит силикагель, обработанный октадецилсиланом, а элюент ом — смесь воды и метанола или ацетонитрила. Эта хроматографическая система очень проста, получить воду и метанол достаточной степени чистоты несложно. Хроматографические свойства системы хорошо воспроизводимы, и если в колонке поддерживается pH < 8, то разделительная способность не меняется в течение длительного времени.
Области применения полярных и неполярных фаз перекрываются. На рис. VI. 22 сравнивается разделение на^полярной неподвижной фазе (химически связанный эфир) с неполярным элюент ом и разделение методом «обращенной» хроматографии, т. е. на неполярной неподвиж-
2 4
t, мин
Инертное
S
а
5
Р О
О Си
О с Ж Ч -Я S
4 К
Й& СО S
о '
кг Ч
и S
5 Й »S s
С к s
fN *
гм ?9
§ а
5 s 2 * с 5
К 2 ' * 1-» <N
U ГО .г
Н ^ 'Г й ^ Э
s 1-1 S
* О
S ь f?
a s
х
? з
Ш S
(D 2
г v О ^ 5 ° 2 S и
II
?!
п S S 5
СП
Я 2
JS ^
О X
5 s
X и
U.
6 3 л "“
а ..
Ъ §
ш
п • *
S У 1-й
Я- • « W, ‘
U <4
SE”3!
В S г
I"
*!
* I
I л-.
Ю
ЛЕ
8.| С I
I- f феинлзамещенная смола).
156
Глава VI
г
4 3 2 1
t, мин
Рис. VI.23. Разделение кортикостероидов [54].
Колонка: 30 см х 4 мм (внутр.); обращенная фаза: октадецнлсилан на меркосорбе Si 100, d, * 10 мкм;
элюент: вода - метанол (25 :75); и = 5,2 мм/с; Ар = 175 атм.
Проба: 1 — инертное вещество; 2 — кортизон; 3 — гидрокортизон; 4 — тетрагндрокортнзон; 5 — 11 -дезок* снкортнкостерон; 6 — 11-дезокснкортнкостеронацетат.
ной фазе с полярным элюентом [93]. В системе с обращенной фазой порядок вымывания производных мочевины, как это и следовало ожидать, меняется на обратный, причем сильнее всего удерживается соединение с самой длинной алкильной группой (небурон).
В работах [94-96] описано разделение ароматических углеводородов и пестицидов в системах с обращенной фазой [94-96]. Используя в качестве элюента смесь метанол - вода, можно отделить бензол от дейтеробензола [97]. Поскольку неполярные вещества очень сильно удерживаются на обращенных фазах, то такие фазы пригодны для извлечения органических примесей из воды [98, 99] или морских осадков [100].
Проводя элюирование водно-метанольными смесями различного состава, можно без труда разделить или определить в биологических материалах кортикостероид [104] (рис. VI.23), а также андроген и прогестерон [30], фитосгерин [101], сердечные яды [30, 102], жабий яд [103].
Адсорбционная хроматография
