Жидкостная хроматография при высоких давлениях - Энгельгардт Х.
Скачать (прямая ссылка):
Если содержание воды в колонке с силикагелем увеличивается в результате повышения ее содержания, например в хлористом метилене от 6 • 10" 3 до 0,2%, то к' увеличивается в 5 • 102 — 1 • 103 раз. Время элюирования и вместе с тем разделения можно увеличить, если увеличивать содержание воды не ступенчато, а непрерывно.
С целью сокращения элюирования проводится программированное дезактивирование неподвижной фазы или вытеснение сильно адсорбирующихся соединений водой. Следует, однако, отметить, что при разделении указанным способом возможно одновременное элюирование нескольких соединений. Главным образом это вызывается проскоком зоны воды. Кроме того, конец зоны вещества, элюируемого с образованием хвоста, в некоторых случаях может так сжаться, что его можно принять за следующий пик. С проблемой «расщепления» зоны вещества хроматографисты столкнулись уже в классической колоночной хроматографии [44].
б. Переключение колонок. Метод переключения колонок широко распространен в газовой хроматографии [45], особенно в промышленной газовой хроматографии [46], и используется также в жидкостной хроматографии [37, 47 - 50]. Разделение пробы проводится
Рис. VI.15. Разделение с переключением колонок [49].
Колонка /: 25 см х 2,7 мм (внутр.); силикагель, 2 м2/г; колонка 11'. 25 см х 2,7 мм (внутр.), силикагель, 15 м2/г; элюент: вода — этанол — изооктан, а — разделение на колонках / и 11; б — разделение на колонке 1; в — разделение с переключением колонок: пики 7—12— колонка /, пнки 1-6 — колонки 1 н 11. Пробы: 1 — децилбензол; 2 — прогестерон; 3 — андростандион; 4 — метилтестостерон; 5 - тестостерон; 6 — а нд рос те рои; 7 — 16 а-окснпрегиен-4-дион-3,20; 8 — 19-оксиандростен-4-днон-3,17; 9 — кортикостерои; 10 — 11-дегндрокортикостерон; 11 — кортизон; 12 — кортизол.
144
Глава VI
при постоянном составе подвижной фазы последовательно или параллельно на различных неподвижных фазах. Состав элюента не меняется, а меняются главным образом длина разделительной колонки (число теоретических тарелок), сила сорбции (величина удельной поверхности), соотношение фаз (различные степени покрытия одинаковыми неподвижными фазами) и селективность (различные химически связанные неподвижные фазы).
Чаще всего предварительное разделение проводят на относительно коротких колонках и фракции этих элюатов далее разделяют на других разделительных колонках с теми же самыми или другими неподвижными фазами. На рис. VI.15 показано оптимизирование разделения стероидов с помощью переключения колонок [49]. Отделенные на колонке I элюируемые первыми стероиды поступают в колонку II и находятся там до тех пор, пока из колонки I не будут элюированы разделенными более сильно удерживающиеся стероиды (пики 7—12). После этого поток элюента переключают на колонку II и на ней разделяют и элюируют другие стероиды (пики 1—6). Состав элюента остается прежним. Из-за низких коэффициентов диффузии дополнительного размывания полосы при этом не наблюдается. Следует позаботиться, чтобы в переключающем вентиле и в его подводящих коммуникациях не происходило размывания полосы.
4. Градиентное элюирование.
Программирование состава элюента
Градиентным элюированием называют программированное увеличение элюирующей силы элюента. Этот метод программирования
Таблица VI. 4
Ряд элюентов для градиентного элюирования по Скотту ]51]
Элюент Концентраиня, %
1. н-Гептан 100
2. Четыреххлористый углерод 100
3. Четыреххлористый углерод/хлороформ 58/42 (по объему)
4. Четыреххлористый углерод/хлороформ/ 36/26/38 (по объему)
1,2-дихлорэтан
5. Четыреххлористый углерод/хлороформ/ 20/14/21/45 (по объему)
1,2-дихлорэтан/2-нитро пропан
6. Четыреххлористый углерод/хлороформ/ 14/11/14/33/28 (по объему)
1,2-дихлорэтан/2-нитропропан/нитроме-
тан
7. Нитрометан/пропилацетат 36/64 (по объему)
8. Метилацетат 100
9. Ацетон 100
10. Этанол 100
11. Метанол 100
12. Вода 100
Адсорбционная хроматография
145
Таблица VI.5
Ряд элюентон для градиентного элюированнн по Снайдеру [54] для силикагеля
Элюент Концентрация (по объему), % Элюирующая сила
1. Пентан 0,00
2. Пентан/2-хлорпропан 95,8/4,2 0,05
3. Пентан/2-хлорпропан 90/10 0,10
4. Пентан/2-хлорпропан 79/21 0,15
5. Пентан/этиловый эфир 96/4 0,20
6. Пентан/этнловый эфир 89/11 0,25
7. Пентан/этнловый эфир 77/23 0,30
8. Пентан/этиловый эфир 44/56 0,35
9. Этиловый эфир/метанол 98/2 0,40
10. Этиловый эфир/метанол 96/4 0,45
11. Этиловый эфир/метанол 92/8 0,50
12. Этиловый эфир/метанол 80/20 0,55
13. Этиловый эфир/метанол 50/50 0,60
представляется наиболее перспективным, так как позволяет провести оптимальное разделение очень сложных смесей. Благодаря многообразию элюентов разделение смесей с самой разной полярностью можно проводить как на полярных, так и на неполярных неподвижных фазах. На рис. VI. 16 приведена хроматограмма смесй, содержащей 21 компонент самой различной полярности, начиная с неполярного углеводорода сквалана и кончая растворимой в воде полярной глюкозой; хроматограмма получена с помощью метода ступенчатого градиентного элюирования. Элюирование смеси осуществлялось 12 элюентами различной элюирующей силы. Выбор элюирующих смесей (табл. VI.4) проводился в соответствии с теоретическими представлениями Скотта [51 — 53]. Элюенты подбирались таким образом, чтобы результирующий градиент давал линейное увеличение элюирующей силы, приведенный объем удерживания пробы в предшествующем элюенте был в 2—3 раза больше, чем в последующем, т. е. отношение обоих значений к' (к1 в первом элюенте/fc' во втором элюенте) составляло примерно 2,5 [51]. При подборе элюентов, кроме того, учитывалось, что по мере снижения эффективной молекулярной массы уменьшается и влияние дисперсионных сил. Разумеется, такое разделение можно провести только в приборе с транспортным детектором, так как некоторые растворители поглощают в УФ-области (< 300 нм).
