Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Химия -> Аберкромби Д. -> "Аффинная хроматография" -> 8

Аффинная хроматография - Аберкромби Д.

Аберкромби Д., Алленмарк С, Арамэ С, Бара-бино Р. Аффинная хроматография — М.:Мир, 1988. — 278 c.
ISBN 5-03-000480-7
Скачать (прямая ссылка): affinnayahromotograf1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 2 3 4 5 6 7 < 8 > 9 10 11 12 13 14 .. 106 >> Следующая

22
Глава 1
тельному разбавлению раствора в реакции иммобилизации ли-ганда. Для преодоления этой проблемы может оказаться полезным заполнение объема между частицами инертной средой^ например углеводородом, с тем, чтобы направить реакцию активации внутрь частиц.
Сферическая целлюлоза была предложена как удобная матрица для аффинной хроматографии ввиду правильной сферической формы ее частиц, высокой пористости и хорошей механической прочности, а также ярко выраженной гидрофильное™. В одном сообщении [19] указывается на возможность хроматографии на иммобилизованном красителе, однако в работе [20] эти данные не подтвердились. В то же время ряд ферментов был успешно иммобилизован на сферической целлюлозе.
4. ДЕКСТРАН
Декстран — полисахарид, состоящий из остатков а- 1,6-свя-занной глюкозы; он выделен из Leuconostos mesenteroides. Коммерческий продукт, сефадекс, применяющийся для гель-фильтрации (табл. 3), получают поперечной сшивкой декстранов эпихлорогидрином; сефадекс производится в виде сферических гранул. Наличие гидроксильных групп в полисахаридном каркасе делает эту матрицу более гидрофильной, чем агароза. Сефадекс может обратимо набухать из сухого состояния без значительных изменений хроматографических свойств геля после повторных циклов высушивания и набухания. Сефадекс химически весьма стабилен, выдерживает обработку 0,25 M NaOH при 60 °С в течение 2 мес или 0,02 M HCl в течение 6 мес [21]. Более того, влажный сефадекс сохраняет свойства после автоклавирования. Однако продолжительное действие окисляющих агентов может приводить к увеличению содержания карбоксильных групп.
Производные поперечно-сшитого декстрана были бы идеальной матрицей для аффинной хроматографии, но низкая степень пористости механически наиболее стабильных форм (от G-IO до G-75) сводит на нет их преимущества. Меньшая степень поперечной сшивки приводит к менее стабильным гелям. Активация декстрановых гелей обычными методами может вызывать дальнейшую поперечную сшивку геля, в результате чего молекулы ферментов даже с низкой молекулярной массой фактически не могут проникать внутрь шариков геля.
5. ПОЛИАКРИЛАМИД
Полиакриламидные гели состоят из углеводородного скелета с присоединенными к нему карбоксиамидными группами. На рис. 3 показана линейная полиакриламидная цепь.
Получение матриц
23
Полиакриламидные гели стабильны в диапазоне pH 1-ї-10 и при использовании обычных элюентов. Они не содержат заряженных групп, и поэтому ионообменные взаимодействия с хро-матографируемыми веществами минимальны. Полиакриламидные гели биологически инертны и вследствие этого не подвержены микробной атаке. Поскольку частицы геля сильно прилипают к чистой стеклянной поверхности, в работе [22] рекомендуется использовать силиконизированную стеклянную или полиэтиленовую лабораторную посуду. Недостаточная механическая прочность полиакриламида ограничивает его применение в качестве матрицы для аффинной хроматографии.
После соответствующей хямической обработки на основе полиакриламидных гелей можно получить твердые носители,
- СНтСН-СН-,-CH-CHrCh-CH2-
i 'i l ]
CONH2 CONH2 CONH2 Рис. 3. Линейная полиакриламидная цепь.
удобные для присоединения ряда лигандов [22]. Так, при взаимодействии с большим избытком этилендиамина при 900C могут быть получены аминоэтилпроизводные, а при действии избытка гидразина при 500C — гидразидные производные. Реакцией с п-нитробензоилазидом в присутствии Ы^'-диметил-формамида, триэтиламина и тиосульфата натрия аминоэтилпроизводные полиакриламидных гелей могут быть переведены в соответствующие я-аминобензамидоэтилпроизводные.
Один из основных производителей полиакриламидных гелей— Bio-Rad Laboratories — выпускает продукт под торговым названием «биогель Р». Он получается сополимеризацией ак-риламида и М,1М'-метиленбисакриламида. Биогель P производится с различным размером пор (от биогеля Р-2 с пределом исключения по молекулярной массе 1800 до биогеля Р-300 с пределом исключения по молекулярной массе 400 000). Все виды биогелей выпускаются с размерами частиц 50—100, 100— 200, 200—400 и 400 меш. Помимо этих продуктов фирма Bio-Rad Labs, выпускает гели-ионообменники, например слабый кислотный катионообменник биогель СМ, а также промежуточные продукты для аффинной хроматографии, такие, как аминоэтильные или гидразидные производные биогелей Р-2 и Р-60.
В торговлю поступают и предварительно активированные полиакриламиды, разновидность которых известна как энза-крилы (Koch-Light, Великобритания). Эти гели предназначены для иммобилизации ферментов. Энзакрил АН представляет собой гидразидное производное полиакриламидных гелей, а энзак*
24
Глава 1
рил AA — полиакриламидный гель, содержащий остатки ароматической кислоты. Энзакрил-полиацеталь представляет собой сополимер диметилацеталя N-акрилоиламиноацетальдегида и г4,ЬГ-метиленбисакриламида и связывает белки через ЫНг-группы.
6. ТРИСАКРИЛ
Е. Бошетти (?. Boschetti)
Трисакрилы — серия гелей, производимых фирмой IBF Reac-tifs в Париже и распространяемых фирмой LKB. Они представляют собой синтетические гели, применяемые в качестве сорбентов для гель-фильтрации и носителей для ионообменной и аффинной хроматографии. Они получаются полимеризацией уникального мономера Ы-акрилоил-2-амино-2-гидроксиметил-1,3-пропандиола (рис. 4). Структура получаемого высокомолекулярного соединения представлена на рис 5.
Предыдущая << 1 .. 2 3 4 5 6 7 < 8 > 9 10 11 12 13 14 .. 106 >> Следующая
Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed