Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
( -)-цепи линейной ДНК захватывает кольцевая (-Н)-цепь. Попытайтесь также
определить направление миграции ветвей вдоль ( -)-цепи. (Линейная
двухцепочечная ДНК была разрезана по границе между фрагментами а и с, см.
карту рестрикции на рис. 5-28, Б.)
Б. Рассчитайте скорость миграции ветвей, принимая длину этой ДНК
равной 7 т. п. н.
B. Что произойдет, если линейная двухцепочечная ДНК получит вставку из
500 негомологичных нуклеотидов между рестрикционными фрагментами е и а?
5-35 Два гомологичных родительских дуплекса и два набора потенциально
возможных продуктов их рекомбинации схематически-изображены на рис. 5-29.
Изобразите сформированное родительскими дуплексами соединение Холлидея,
которое могло бы давать указанные продукты рекомбинации. Пометьте левый
конец каждой цепи в соединении Холлидея как 5' или 3', так чтобы было
понятным его соотношение с родительскими и рекомбинантными дуплексами.
Ответьте, какие цепи следует разрезать, чтобы получить каждый набор
продуктов рекомбинации. Наконец, изобразите графически, как должны
выглядеть эти продукты после одного цикла репликации.
5-36 Когда плазмидную ДНК из Е. coli исследуют с помощью электронного
микроскопа, большая часть плазмид имеет вид моно-
А, Электрофоретическое разделение меченых рестриктов
Б, Карта рестрикции вирусной ДНК
5' -* 3'
Время, мин
5'.
3'"
5' = 3'=
32 Глава 5
Рис. 5-30. Плазмидные молекулы, наблюдавшиеся до обработки рестриктазой,
вводящей единичные разрывы, (А) и после такой обработки (Б) (задача 5-
36).
А До рестрикции
Мономер
Форма "восьмерки" (димер)
Димер
Б После рестрикции
Линейные молекулы
мерных колец, но встречаются и другие формы, например димерные и
тримерные кольца. К тому же около 1 % молекул имеют вид восьмерок, у
которых обе петли одинаковы (рис. 5-30, А).
Вы предполагаете, что эти "восьмерки" представляют собой
промежуточные продукты рекомбинации с образованием димера из двух
мономеров (или двух мономеров из димера). Чтобы выяснить, что это-
скрученные димеры или просто соприкасающиеся мономеры, вы обрабатываете
препарат ДНК ферментом рестрикции, который разрезает в единственном сайте
в мономере, и вновь исследуете молекулы. После рестрикции обнаруживаются
только две формы: 99% молекул ДНК имеют форму линейных мономеров и 1%
Х'Ф°РМУ (рис. 5-30, Б). Вы замечаете, что х_Ф°р-ма обладает
примечательным свойством: два длинных плеча имеют одинаковую длину так
же, как и два коротких. К тому же сумма длин короткого и длинного плеч
равна длине мономерной плазмиды. Однако положение точки перекрещивания
совершенно случайное.
Не будучи полностью уверенным в себе и чувствуя, что, по-видимому,
допущена какая-то ошибка, вы показываете ваши снимки коллеге. Он считает,
что вы видите промежуточные продукты рекомбинации, которые возникают при
спаривании случайным образом по гомологичным сайтам.
A. Прав ли ваш коллега? Каков ход его мыслей?
Б. Будут ли результаты другими, если повторить те же эксперименты со
штаммом Е. coli, несущим нефункциональный ген recAl
B. Как выглядели бы %-формы, если бы фигуры типа восьмерки были
промежуточными продуктами сайт-специфической рекомбинации между
мономерами?
i Основные генетические механизмы 33
Г. Как выглядели бы х-формы, если бы фигуры типа восьмерки были
промежуточными продуктами полностью случайной негомологичной рекомбинации
между мономерами?
Вирусы, плазмиды и транспозоны (МБК 5.5)
5-37 Заполните пропуски в следующих утверждениях.
A. Вирусы, инфицирующие бактерии, называются_____________
Б. Размножение вирусов летально для клетки-хозяина, если для того,
чтобы образовавшиеся вирусные частицы вышли наружу, она
должна_______________
B. Белковая оболочка, окружающая вирусный геном, называется
Г. Самый внешний покров у вирусов, _______________,-это типичная
мембрана, обычно приобретаемая вирусными частицами в процессе
отпочковывания от плазматической мембраны.
Д. Поскольку в нормальных клетках нет ферментов, которые
непосредственно копировали бы РНК на матрице РНК, то вирусы
с РНК-геномом должны кодировать________________ или___________,
чтобы реплицироваться.
Е. Если вирусная РНК выполняет роль непосредственно мРНК, то
вирус называется____________; если в роли мРНК выступает РНК,
комплементарная вирусной, то вирус называется_______________
Ж. ___________бактерии несут в своих хромосомах "дремлющий", но
потенциально активный вирусный геном: интегрированный вирусный геном
называют_____________; этот термин используется также
при описании аналогичных вирусных геномов в клетках млекопитающих.
3. Вирусы, которые могут встраивать свою ДНК в бактериальные хромосомы,
называются__________________
И. Животные клетки, в которых не развивается литическая инфекция,
