Молекулярные основы действия ферментов - Севери Г.А.
Скачать (прямая ссылка):
установлено, что в отсутствие субстратов, а также у инактивированной ФФК
stcc = 13,5 S. Авторы считают, что и 12 S- и 13,5 5-формы являются
тетрамерами, но, очевидно, активная форма менее симметрична или каким-то
образом разрыхлена.
В заключение упомянем о работе, выполненной в нашей лаборатории [9].
При исследовании растворимой митохондриальной Н+АТФазы из сердца быка
(фактор Fi) как в сопряженной регенерирующей системе, содержащей
пируваткиназу с ее субстратом фосфоенол-пируватом + лактатдегидрогеназа
(рис. 2А, В), так и в системе с рН-индикатором "нейтральный красный"
(рис. 2 Б, Г) (уд. активность соответственно 50 ед./мг и 20 ед./мг) было
установлено* что коэффициент седиментации активного фермента (12,4+0,4 S)
с точностью до ошибки измерений совпадает с данными, которые получаются
при обычной скоростной седиментации в отсутствие субстрата Mg-АТФ. По-
видимому, этот фермент не изменяет своей общей конфигурации при гидролизе
АТФ. В ходе этой работы было обнаружено, что гидростатическое давление в
ячейке ультрацентрифуги инактивирует Fi, причем тем скорее, чем выше
скорость вращения ротора (измерения проводили при 48000, 60 000 и 68 000
об/мин). Инактивация приводила к искривлению графиков In r(t), из наклона
которых вычисляется s, и это вынудило искать пути к стабилизации
фермента. Измерения удалось произвести в двух вариантах. 1. Фактор Fi был
обработан бифункциональным сшивающим агентом - диметилсуберимидатом - в
условиях, когда в среднем на молекулу фермента приходилась одна сшивка;
при этом сохранялось около 40% активности и исчезала чувствительность к
давлению (по крайней мере до 300 атм).
2. Как оказалось, чувствительность F\ к давлению быстро снижалась с
уменьшением скорости реакции. Это позволило осуществить опыты нужной
продолжительности при высокой концентрации АТФ, но низкой концентрации
Mg2+.
Инактивация F( под гидростатическим давлением объясняется
186
диссоциацией фермента на субъединицы, что свидетельствует об отличии от
нуля парциального мольного объема реакции диссоциации [10].
Приведенные примеры иллюстрируют некоторые возможности метода САФ,
хотя далеко не исчерпывают их. В частности, из-за ограниченности места и
сложности проблемы оставлены в стороне теория и ее приложение к обратимо-
взаимодействующим ферментным системам.
Подводя итоги всему изложенному в этой статье, следует отметить, что
при известной настойчивости метод САФ в сочетании с другими методами
может дать такую информацию о физикохимических и каталитических свойствах
ферментов, которую затруднительно или вовсе невозможно получить другими
методами.
Вместе с тем необходимо помнить об опасности появления артефактов,
если пренебречь теми многочисленными контрольными опытами, о которых мы
здесь кратко упоминали.
ЛИТЕРАТУРА
1. Боуэн Т. (1973) Введение в ультрацеитрифугирование, Мир, М.
2. Черняк В. Я. (1978) в сб. Физико-химические методы в молекулярной
биологии, Изд-во Моск. ун-та, М., 65-95.
3. Cohen R. (1963) С. R. Acad. Sci. (Paris), 256, 3513-3515.
4. V i п о g г a d J., Bruner R., Kent R., W e i g 1 e J. (1963) Proc.
Natl.
АгяН Sri USA 4.Q Q02___910
5. Luther'M. a!, Gilbert H. F" Lee J. C. (1983) Biophys. J. 41, 272a.
6. Vinograd J., Bruner R. (1966) Fractions N 1, 2-9.
7. Cohen R., Mire M. (1971) Eur. J. Biochem. 23, 267-275.
8. Kemper D. L., Everse J. (1973) Methods Enzymol. 27, 67-82.
9. Chernyak V. Ya., Kozhanova Z. E., Chernyak В. V., Kozlov I. A.
(1979) Eur. J. Biochem. 98, 585-589.
10. Черняк В. Я. (1984) здесь, 161-175.
11. Cohen R., Giraud В., Messiach A. (1967) Biopolymers 5, 203-225.
12. Wei G. J., Deal W. C. (1979) Biochemistry 18, 1129-1137.
13. Cohen R., Claverie J.-M. (1975) Biopolymers 14, 1701-1716.
14. Taylor B. L., Barden R. E" Utter M. F. (1972) J. Biol. Chem. 247,
7383-7390.
15. Cohen R., Mire M. (1971) Eur. J. Biochem. 23, 276-281.
16. Harrington 'W. F., Кege 1 es G. (1973) Methods
Enzymol. 27,
306-345.
17. Taylor B. L., Frey W. H, Barden R. E., Scrutton М. C.,
lit-
• ter M. F. (1978) J. Biol. Chem. 253, 3062-3069.
18. H es ter b er g L. K., Lee J. C. (1979) Arch. Biochem.
Biophys. 197,
500-502.
ОГЛАВЛЕНИЕ
Варфоломеев С. Д., Мевх А. Т., Муратов В. К.,
Игумнова Н. Д., Чурюканов В. В.
ПРОСТАГЛАНДИН- И ТРОМБОКСАНСИНТЕТАЗЫ. МЕХАНИЗМЫ ИНГИБИРОВАНИЯ
ЛЕКАРСТВЕННЫМИ ПРЕПАРАТАМИ..............................
Виноградов А. Д., Васильева Е. А
О РЕЛАКСАЦИОННЫХ СВОЙСТВАХ МИТОХОНДРИАЛЬНОЙ АТФазы Вульфсон П. Л.
МОЛЕКУЛЯРНЫЕ СВОЙСТВА И РЕГУЛЯЦИЯ ФЕРМЕНТАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ КИНАЗЫ
ФОСФОРИЛАЗЫ............................................
Муронец В. И.
АКТИВНЫ ЛИ СУБЪЕДИНИЦЫ НАД-ЗАВИСИМЫХ ДЕГИДРОГЕНАЗ? Перфильева Е. А,
Буларгина Т. В., Северин Е. С.
СТРУКТУРА И РЕГУЛЯЦИЯ АКТИВНОСТИ АДЕНИЛАТЦИКЛАЗНОГО КОМПЛЕКСА
.......................................................
Рахманинова А. Б., Ягужинский Л. С.
