Введение в методы микроскопического исследования - Аппельт Г.
Скачать (прямая ссылка):
В настоящее время интерференционная микроскопия используется в науке и технике при исследовании неокрашенных объектов значительно шире, чем раньше.
Известные фирмы конструируют микроскопы, предназначенные специально для интерференционной микроскопии. В них установлены двупреломляющие пластинки, вызывающие интерференцию.
Этот метод служит для того, чтобы сделать видимыми в микроскоп объекты, слабо поглощающие свет и отличающиеся от среды, в которую они заключены, лишь показателем преломления. С его помощью можно наблюдать, например, отпечатки пальцев на стекле, свили в стекле, процессы растворения и смешивания, когда освещение по методу светлого поля в проходящем свете позволяет обнаружить лишь слабые очертания.
Для освещения по Теплеру вместо диафрагмы осветителя устанавливается центральная диафрагма, которая показана на рис. 104.
Применяются объективы с небольшим увеличением, как, например, микротары Цейсса с ирисовой диафрагмой, поскольку они могут употребляться с окулярами. Конденсор изображает диафрагму поля в плоскости диафрагмы объектива. Ирисовая диафрагма объектива затягивается так, чтобы ее края совпали с краями изображения центральной диафрагмы. Тогда никакой прямой свет не сможет проникнуть в объектив. Получается темное поле.
Рис. 273. Освещение по методу Теплера. Диафрагма перед лампой 1 изображается с помощью конденсора в плоскости диафрагмы
объектива 4.
1 — диафрагма; 2 — препарат; 3 — конденсор; 4 — диафрагма в объективе.
Рис. 274. Расположение диафрагмы при освещении по Теплеру при применении полудисков, закрывающих половину коллектора и объектива. Они нужны в том случае, когда объектив не снабжен ирисовой диафрагмой.
1 — лампа; 2 — полудиск, закрывающий половину коллектора; 3 — коллектор; * — конденсор типа очкового стекла; 5 — объект; 6 — полудиск, закрывающий половину объектива; 7 — объектив.
Различие в показателях преломления объекта и его среды вызывает различные отклонения косо падающих лучей. Отклоненные пучки лучей попадают в объектив и строят изображение. Объект выглядит светлым на темном фоне.
В микроскопии при освещении по методу Теплера в последнее время появились некоторые новшества.
Рис. 275. Отпечаток пальца на предметном стекле. Увеличение 30 : 1. Съемка произведена по способу Теплера (снимок автора).
Вильска расположил вокруг центральной диафрагмы концентрические серые кольца различной плотности. Благодаря этому наступило значительное усиление контрастности изображений, полученных с помощью метода освещения по Теплеру. Эти изображения очень сходны с фазовоконтрастными.
По Мейеру-Арендту, если заменить концентрические серые кольца кольцевыми цветными фильтрами, располо-
«
шенными так, чтобы внутри был синий, затем зеленый, желтый и снаружи красный фильтры, то возникает цветное изображение, приближающееся по своему характеру к цветным фазовоконтрастным изображениям.
Как показали наши собственные исследования, если половину периферической части поля, не закрытой центральной диафрагмой, перекрыть красным фильтром, а другую половину — зеленым фильтром, то структуры объекта представятся в меняющихся сочетаниях зеленого и красного цветов, благодаря чему облегчается распознавание деталей микроскопического объекта.
13.3. КОМБИНИРОВАННОЕ ОСВЕЩЕНИЕ ПАДАЮЩИМ И ПРОХОДЯЩИМ СВЕТОМ
При описании освещения контрастирующими цветами в падающем свете этот метод был уже упомянут (см. главу 10, раздел 10.4). Здесь остается лишь дополнительно указать, что он может быть применен также и для белого света. Объект при этом просвечивается снизу, как при освещении проходящим светом по методу светлого поля. Освещение падающим светом происходит сверху. Благодаря включению серых фильтров или дисков из неофана на пути потока лучей свет от обоих источников должен отличаться по яркости друг от друга. При одинаковых яркостях применение комбинированного метода невозможно. Применение комбинированного освещения падающим и проходящим светом особенно полезно при исследовании изделий из текстиля и других волокнистых объектов.
ФЛУОРЕСЦЕНТНАЯ МИКРОСКОПИЯ
14.1. ПРИНЦИП ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ МИКРОСКОПИИ
Флуоресцентная микроскопия представляет собой новейший метод исследования, развитый Леманом и Рейхер-том и пользующийся все возрастающей популярностью.
Препараты облучаются коротковолновыми лучами, которые глаз не воспринимает, но которые, попадая на структуры препарата, вызывают колебания электронов.
Благодаря этому возникают колебания более длинных волн видимого света. От этого различные структуры в препарате светятся различными цветами1.
Флуоресценция вызывается с помощью видимого синего света, ультрафиолетового излучения, а также катодных и рентгеновских лучей.
В микроскопии употребляют синий свет и ультрафиолетовое излучение с длиной волны от 300 до 400 м/х.
Под флуоресценцией подразумевают люминесценцию в период облучения коротковолновыми лучами света. Фосфоресценция — это длительная устойчивая флуоресценция после прекращения облучения. В противоположность этому радиоактивные вещества светятся без облучения внешним источником. Объекты во флуоресцирующем микроскопическом препарате выглядят светящимися определенным цветом в темном поле.
