Введение в методы микроскопического исследования - Аппельт Г.
Скачать (прямая ссылка):
Возникают совершенно новые картины; те мелкие существа, которые до сих пор после фиксации изучались только в виде изувеченных трупов, мы сегодня наблюдаем прижизненно.
Это дало много нового, особенно в медицине. Выяснилось, что многое из известного до сих пор является лишь
следствием окрашивания. Поэтому, вместо того чтобы исследовать белые кровяные тельца на нейтрофилию, базофилию и эозинофилию, в фазовоконтрастном микроскопе наблюдают амебоидные движения живых белых клеток крови.
Новый метод используется в медицине при исследованиях крови, мочи, тканей (быстрая диагностика рака), в бактериологии и паразитологии; в настоящее время он стал незаменимым. В общей биологии и в других областях науки, например в почвоведении, также можно успешно пользоваться этим способом исследования.
Даже при изучении окрашенных препаратов с успехом может быть применен способ фазового контраста. Изображения окрашенных гистологических срезов в фазовоконтрастном микроскопе обогащаются контрастами. Однако наиболее пригодными являются слабо или вовсе не окрашенные препараты.
Оптические основы этого способа.
Обыкновенные окрашенные препараты поглощают часть света, применяющегося для освещения. Если представить себе лучи как волновые колебания, то это будет означать, что амплитуда волн, а отсюда и яркость изображения благодаря окраске уменьшаются. Препарат будет выглядеть несколько темнее. Наоборот, неокрашенные препараты не поглощают света. Но они изменяют фазу проходящих сквозь них световых волн. Однако до сих пор это оставалось невидимым для человеческого глаза.
Нужно было сделать видимыми эти изменения фазы световой волны, возникающие при прохождении сквозь неокрашенный объект. Этого достиг Цернике.
В объектив вносится кольцеобразный серый слой, изменяющий фазу; он наносится на линзу фазовоконстраст-ного объектива. Благодаря этому возникает сдвиг фазы боковых дифракционных максимумов относительно нулевого дифракционного максимума (сравни раздел 1.2. в главе 1).
Для зтого необходима еще кольцевая диафрагма конденсора такой же апертуры.
В противном случае возникает обыкновенное изображение в светлом поле. Кольцевая диафрагма конденсора должна
/
Рис. 242. и 243. Амплитудные и фазовые изменения при волновых
колебаниях.
1 — амплитудные изменения; 2 — фазовые изменения.
Рис. 244—246. Penicillium notatum Westltng, штамм Qu 176, Mycee. Увеличение 800 :1 (снимки фирмы Рейхерт)
i. Рис. 214. Освещение по методу светлого поля.
Рис. 245. Освещение по методу темного поля.
г
быть свободно центрируема с тем, чтобы при наблюдении с удаленным из тубуса окуляром за задней линзой объектива изображение диафрагмы точно совпало с изображением изменяющего фазу слоя. Для этой цели служит вспомогательный микроскоп, который вставляется в тубус микроскопа вместо окуляра. В микроскопе «Оптовар» фирмы Цейее-Оберкохен (см. рис. 102) вспомогательный микроскоп вделан внутрь, благодаря чему при установке фазового контраста не требуется никакой перестройки микроскопа. На конденсоре предусмотрено особое центрирующее устройство, с помощью которого производится совмещение обоих колец.
• о Л* I
«•Г/ ’•v
...... •
%
«г •
•V :.*з
sSf
4
* 9;
И’Г*-
ф
pdt. т ' '•V 4
¦го,-
(*г*
.в®* I,
if 1
/ ' ч '
/ - -
Рис. 246. Фазовый контраст.
После выполнения всех этих предпосылок разность фаз волн света выступает в изображении в виде контрастов черного и белого.
Таким образом, для фазовоконтрастной микроскопии применяют специальные объективы и специальные конденсоры и, кроме этого, вспомогательный микроскоп.
Наш глаз лучше всего видит неокрашенные препараты в желто-зеленом свете. Поэтому в фазовоконтрастной микроскопии предпочитают употреблять желто-зеленые фильтры, которые вставляют в держатель диафрагмы фазового конденсора (например, фильтр VG4 фирмы Шотт в Йене).
Рис. 247 и 248. Яйцеклетка из яичника женщины. Препарат окрашен гемалаун-эритрозином. Масштаб 450 : 1
(снимки автора).
Рис. 249. Фазовый конденсор (вид сверху)
Рис. 249 и 250 Фазовый конденсор Народного предприятия Карл Цейсс в Йене.
